ユーイング肉腫におけるSkp2遺伝子発現制御機構の解析と分子標的治療への応用

ユーイング肉腫は悪性骨軟部腫瘍の中で最も生命予後不良な腫瘍の一つである。ユーイング肉腫症例の多くで染色体転座t(11:22)の結果、異常な融合遺伝子EWS-Fli1が生じる。EWS-Fli1は強力な転写因子として働き、ユーイング肉腫の発がん原因と考えられている。これまでに我々は、EWS-Fli1が癌抑制遺伝子Rbに関係した細胞周期制御因子(p27,p21,cyclin E)を標的とし、このRb経路の阻害がユーイング肉腫発がんに深く関与していることを明らかにした。これらのEWS-Fli1の標的遺伝子の中で、臨床的予後と相関するものについて調べた結果、p27発現レベルの低下がユーイング肉腫患者の最も強い予後予測因子であることが判明した。さらに、EWS-Fli1によるp27発現抑制には、ユビキチン・プロテオソーム経路が関与しており、p27をユビキチン化して蛋白質分解を引き起こすユビキチンリガーゼSkp2の関与が示唆された。しかし、EWS-Fli1がいかにしてSkp2によるp27分解を促進しているのか、その分子機構はいまだ不明である。そこで、本研究の目的は、1)EWS-Fli1によるp27発現抑制に関与するSkp2の活性化機構を明らかにし、2)その機構を抑制することでユーイング肉腫の増殖を制御できるか検証し、ユーイング肉腫の新しい分子標的治療法の開発につなげることである。本年度は、ヒトSkp2遺伝子プロモーター領域をクローニング、ルシフェラーゼに連結したレポーターコンストラクトを作成し、これを用いてEWS-Fli1によるSkp2プロモーターの活性化が起こることを確認した。また各種の欠失コンストラクトによる詳細な解析を行い、EWS-Fli1が結合しうるDNA領域まで特定した。

ユーイング肉腫は悪性骨軟部腫瘍の中で最も生命予後不良な腫瘍の一つである。ユーイング肉腫症例の多くで染色体転座t(11:22)の結果、異常な融合遺伝子EWS-Fli1が生じる。EWS-Fli1は強力な転写因子として働き、ユーイング肉腫の発がん原因と考えられている。これまでに我々は、EWS-Fli1が癌抑制遺伝子Rbに関係した細胞周期制御因子(p27,p21,cyclin E)を標的とし、このRb経路の阻害がユーイング肉腫発がんに深く関与していることを明らかにした。これらのEWS-Fli1の標的遺伝子の中で、臨床的予後と相関するものについて調べた結果、p27発現レベルの低下がユーイング肉腫患者の最も強い予後予測因子であることが判明した。さらに、EWS-Fli1によるp27発現抑制には、ユビキチン・プロテオソーム経路が関与しており、p27をユビキチン化して蛋白質分解を引き起こすユビキチンリガーゼSkp2の関与が示唆された。しかし、EWS-Fli1がいかにしてSkp2によるp27分解を促進しているのか、その分子機構はいまだ不明である。そこで、本研究の目的は、1)EWS-Fli1によるp27発現抑制に関与するSkp2の活性化機構を明らかにし、2)その機構を抑制することでユーイング肉腫の増殖を制御できるか検証し、ユーイング肉腫の新しい分子標的治療法の開発につなげることである。本年度は、ヒトSkp2遺伝子プロモーター領域をクローニング、ルシフェラーゼに連結したレポーターコンストラクトを作成し、これを用いてEWS-Fli1によるSkp2プロモーターの活性化が起こることを確認した。また各種の欠失コンストラクトによる詳細な解析を行い、EWS-Fli1が結合しうるDNA領域まで特定した。