Ewing肉腫、PNETにおける転写因子EWS-Fli1の標的遺伝子の同定と解析

尤文肉瘤和PNET转录因子EWS-Fli1靶基因的鉴定与分析

• 批准号: 11770805
• 负责人: 田仲 和宏
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770805/
• 关键词: ユーイング肉腫; 融合遺伝子; 転写因子; 細胞周期; 遺伝子治療; Ewing肉腫; PNET; EWS-Fli1融合遺伝子; 標的遺伝子クローニング

Ewimg肉腫(ES)とその類縁腫瘍PNETは、悪性骨軟部腫瘍の中で最も予後不良の腫瘍であるが、その90%以上に染色体転座t(11:22)がみられ、その転座の結果、異常な融合遺伝子EWS-Fli1が生じる。EWS-Fli1は強力な転写因子として働き、正常線維芽細胞をtransformする活性を有するため、ES/PNETのがん化の原因そのものと考えられている。これまでに我々は、アンチセンスオリゴを用いてEWS-Fli1の発現を抑制することで、ES/PNET細胞の増殖が抑制され、その際細胞は細胞周期のG1期に停止することを明らかにした。そこで、アンチセンスオリゴ処理前後のES/PNET細胞よりmRNAおよび蛋白質を抽出し、細胞周期関連因子の発現変化を調べると、G1-S期移行に関わるCyclin D1、Cyclin E、p21およびp27の発現が大きく変化しており、アンチセンスオリゴによる増殖抑制の原因の一つと考えられた。このうちp21遺伝子のプロモーター領域をluciferaseにつないだreporter constructを作成し、ES/PNET細胞にこのreporter constructを導入したところ、reporter遺伝子活性は抑制されていた。ここでアンチセンスオリゴ処理を行うとreporter遺伝子活性が誘導された。また、プロモーター領域内でのEWS-Fli1の結合部位を検索した結果、EWS-Fli1は直接p21プロモーターに結合し、その活性を抑制した。p21発現を誘導する薬剤Na Butylateを作用させると、ES/PNET細胞でのp21発現が濃度依存性に誘導され、細胞の増殖も抑制された。従って、p21はEWS-Fli1の直接の標的遺伝子であり、ES/PNETの増殖に大きく関与していること、ES/PNETの遺伝子治療のターゲットとして有用である可能性が示された。

Ewimg sarcoma (ES), PNET-like tumors, and soft bone and soft tissue tumors, which are the most common and most adverse tumors after treatment, are 9 More than 0% of the にChromosome t (11:22)がみられ, その転の result, abnormal fusion gene EWS-Fli1が生じる. EWS-Fli1 is a powerful factor that can transform normal line-dimensional bud cells. mするActivityを有するため、ES/PNETのがん化のCauseそのものと考えられている.これまでに我々は、アンチセンスオリゴを用いてEWS-Fli1の発appearを suppress することで、ES /PNET cell proliferation is inhibited, and interlineal cells are stopped in the G1 phase of the cell cycle. ES/PNET cells before and after そこで、アンチセンスオリゴ treatment よりmRNA およびprotein をExtraction, cell cycle-related factors, current changes, adjustment, G1-S phase transition, Cyclin D1.Cyclin E. p21およびp27の発成が大きく変化しており、アンの一つと卡えられたの一つと考えられたのセンスオリゴによるproliferation inhibition.このうちp21伝子のプロモーターfield をluciferaseにつないだreporter constructを成し、ES/PNET cells にこのreporter constructをimports and suppresses reporter activity.ここでアンチセンスオリゴ treatment を行うとreporter remains active がinducing された.また, プロモーターでのEWS-Fli1's binding site in the field を検曰した result, EWS-Fli1's direct p21 プロモーターに bindingし, そのactivity をinhibition した. The p21 expression is induced in a concentration-dependent manner and the cell proliferation is inhibited in ES/PNET cells.従って、p21はEWS-Fli1のDirect のtarget’s legacy 伝子であり、ES/PNETの Increased reproduction に大きく关It is useful for the treatment of ES/PNET and ES/PNET.

项目成果

Noriyuki Tsumaki: "Role of CDMP-1 in skeletal morphogenesis: promotion of mesencymal cell recruitment and chondrocyte differentiation."J.Cell Biol.. 144. 161-173 (1999)

Noriyuki Tsumaki：“CDMP-1 在骨骼形态发生中的作用：促进间质细胞募集和软骨细胞分化。”J.Cell Biol.. 144. 161-173 (1999)

宮城知之: "Ewing肉腫患者における末梢血幹細胞採取レジメンの検討"整形外科と災害外科. 49. 278-282 (2000)

Tomoyuki Miyagi：“尤文氏肉瘤患者外周血干细胞采集方案的检查”《骨科和灾难外科》49. 278-282 (2000)。

Akio Sakamoto: "H-ras oncogene mutation in dedifferentiated liposarcoma : Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism analysis."Am.J.Clin.Pathol. (In press). (2001)

Akio Sakamoto：“去分化脂肪肉瘤中的 H-ras 癌基因突变：聚合酶链反应 - 限制性片段长度多态性分析。”Am.J.Clin.Pathol。

Yoshihiro Matsumoto: "Downregulation of EWS-Fli1 fusion protein results in changes in the expression of G1 regulatory genes"Br.J.Cancer. (In press). (2001)

Yoshihiro Matsumoto：“EWS-Fli1 融合蛋白的下调导致 G1 调控基因表达的变化”Br.J.Cancer。

Yuichiro Kuratomi: "Identification of metastasis-promoting sequences in the mouse laminin α1 chain."Exp.Cell Res.. 249. 386-395 (1999)

Yuichiro Kuratomi：“小鼠层粘连蛋白 α1 链中促进转移序列的鉴定。”Exp.Cell Res.. 249. 386-395 (1999)