ＧＰＩアンカーによるタンパク質選別輸送の制御機構の解明

阐明GPI锚蛋白分选运输的控制机制

• 批准号: 23687017
• 负责人: 藤田 盛久
• 金额: $ 17.47万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011-04-01 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23687017/
• 关键词: 糖鎖; 糖脂質; GPIアンカー; GPIアンカー型タンパク質; 翻訳後修飾; 細胞内輸送

昨年度までに、GPIアンカー型レポータータンパク質の細胞表面発現が低下するC41変異株について、責任遺伝子の同定を行い、ドリコールリン酸マンノース利用に関わる遺伝子MPDU1が責任遺伝子であることを明らかにした。さらに、GPIマンノース転移酵素遺伝子の一つであるPIGVによってもC41の一部の表現型が回復した。今年度はさらにこの理由について解析を行い、PIGVが3つのGPIマンノース転移酵素のうち、基質であるドリコールリン酸マンノースの制限下において、律速段階となっていることを示した（Hirata et al (2013) J. Biochem.）。また、半数体細胞と遺伝子トラップ法を利用したGPIアンカー型タンパク質の輸送変異細胞群の取得を行い、変異細胞群から遺伝子変異部位の同定を網羅的に行った。その結果、GARPコンプレックスと呼ばれる４つの因子のうち、VPS51、VPS52、VPS54の３つの遺伝子上にトラップベクターが有意に挿入されていることがわかった。GARPコンプレックスはエンドソーム由来の輸送小胞をトランスゴルジネットワーク（TGN）に融合させる際に必要なtethering factorである。これらの遺伝子について、RNAiによるノックダウン、さらにCRISPR/Cas9によるノックアウトを行い、タンパク質順行輸送の遅延、特にゴルジ体から細胞膜への輸送遅延を引き起こすことを確認した。これらの結果より、エンドソーム-TGNの逆行輸送阻害がTGN-細胞膜の順行輸送に影響を与えることを明らかにした。高発現によってGPIアンカー型タンパク質を細胞膜から遊離させる機能未知遺伝子についても解析を行い、GPIアンカーを切断する新規な酵素遺伝子であることを明らかにしつつある。ノックアウトマウスの作製を行い、胎生致死を示すことが分かった。

Yesterday's annual までに, GPI アンカーtype レポータータンパクquality のcell surface appearance がlow するC41変different strain について, responsibility legacy childの同定を行い、ドリコールリン acidマンノースutilizationに关わる伝子MPDU1がresponsibilities弝子であることを明らかにした.さらに, GPI マンノース転 patient remains 伝子の一つであるPIGV によってもC41 の一phenotype がReply した. This year's reason for the year's analysis is the analysis of the line, PIGV 3つのGPI マンノース転movable enzyme のうち, matrix Hirata et al (2013) J. Biochem.).また、Half of the body cells are still in use. The collection of different cell groups is the same, and the different cell groups are the same as the different parts of the body.そのRESULT, GARPコンプレックスとHUばれる４つのfactorのうち, VPS51, VPS52 , VPS54's の３つの缝子上にトラップベクターが intentionally inserts されていることがわかった. The origin of GARP's transport cellsジネットワーク（TGN）にfusionさせるinteriorにnecessarytethering factorである. CRISPR/Cas9 CRISPR/Cas9トを行い, タンパク品anterograde transport の遅 extension, special にゴルジ体 から cell membrane への transport extension をinduced こすことをconfirmation した. The result of これらのより, エンドソーム-TGN's retrograde transport blocks がTGN-the cell membrane's anterograde transport and affects を and えることを明らかにした. Takaharu is now a GPI type タンパクquality を cell membrane から free させる function unknown legacy についてもanalytic を行い, GPI アンカーを Cut off する新码なzyme 缝子であることを明らかにしつつある.ノックアウトマウスの成を行い、生生死死を说すことが分かった.

项目成果

GPIアンカー生合成に関与する遺伝子群の解析

GPI锚生物合成相关基因分析

• 发表时间: 2013
• 作者: 藤田盛久;中村昇太;平田哲也;村上良子;前田裕輔;木下タロウ
• 通讯作者: 木下タロウ

Sorting of GPI-anchored proteins into ER exit sites by p24 proteins is dependent on remodeled GPI.

• DOI: 10.1083/jcb.201012074
• 发表时间: 2011-07-11
• 期刊: The Journal of cell biology
• 作者: Fujita M;Watanabe R;Jaensch N;Romanova-Michaelides M;Satoh T;Kato M;Riezman H;Yamaguchi Y;Maeda Y;Kinoshita T
• 通讯作者: Kinoshita T

GPIアンカー型タンパク質の切断に関与する新規酵素の機能解析

参与 GPI 锚定蛋白裂解的新型酶的功能分析

• 发表时间: 2012
• 作者: Kinoshita;T.;Y. Maeda and M. Fujita;Morihisa Fujita;Morihisa Fujita;Morihisa Fujita;藤田盛久;Morihisa Fujita;藤田盛久
• 通讯作者: 藤田盛久

細胞工学Vol.30:生体膜ダイナミクスにおけるGPIアンカーの機能

细胞工程第 30 卷：GPI 锚在生物膜动力学中的功能

• 发表时间: 2011
• 作者: Kinoshita;T.;Y. Maeda and M. Fujita;Morihisa Fujita;Morihisa Fujita;Morihisa Fujita;藤田盛久;Morihisa Fujita;藤田盛久;Morihisa Fujita;藤田盛久;平田哲也;Morihisa Fujita;藤田盛久;Morihisa Fujita;藤田盛久;Morihisa Fujita;藤田盛久;藤田盛久
• 通讯作者: 藤田盛久

Glycosylphosphatidylinositol mannosyltransferase II is the rate-limiting enzyme in glycosylphosphatidylinositol biosynthesis under limited dolichol-phosphate mannose availability

• DOI: 10.1093/jb/mvt045
• 发表时间: 2013-09-01
• 期刊: JOURNAL OF BIOCHEMISTRY
• 影响因子: 2.7
• 作者: Hirata, Tetsuya;Fujita, Morihisa;Kinoshita, Taroh
• 通讯作者: Kinoshita, Taroh