内耳感覚毛におけるFGFシグナルの新たな役割

FGF信号在内耳感觉毛中的新作用

• 批准号: 24592572
• 负责人: 喜多 知子
• 金额: $ 3.49万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-24592572/
• 关键词: 内耳; 蝸牛有毛細胞; FGF受容体; stereocilia

まずFGFR1染色像の真偽性を確かめるために、市販の5種類のFGFR1抗体(abcam、sigma、abgent社製)を試した。結果、自作と同一の抗原認識部位(N末近傍)を有する抗体、そして膜貫通領域を抗原部位とする抗体において、stereociliaにおいて染色が認められた。よって、stereociliaにはFGFRIが確かに発現しており、その構造は少なくともIgIドメインと膜貫通領域を保持していると考えられた。次に有毛細胞の機械刺激受容能を調べる目的で、蛍光色素を用いた実験を行なった。新生仔(P2-5)の内耳器官培養にFM1-43を添加したもの、2週齢マウスにAM1-43(PFA固定用)を投与したもの、どちらもFGFR1 conditional KOマウスとcontrolマウスで差は認められず、有毛細胞は発色した。よって、stereociliaの形態に異常が見られたが、機能はしているものと考えられた。今後研究の機会があれば、ABR検査により長期的に聴覚能を評価したい。さらに、ニワトリ内耳蝸牛(E10 ; stereocilia形成時期)のpcdh15抗体による免疫沈降実験の結果、filaminA(stereociliaにおいて、pcdh15との相互作用 : Ramakrishnan NA et al, J Biol Chem. 2012)とFGFR1のバンドが検出されたことから、pcdh15とFGFR1は直接もしくはアダプターを介して複合体を形成している可能性が示唆された。現在、Pcdh15-Tg2742(nul1)マウス(Case Western Reserve Univ. Kumar氏より分与)の解析を検討している。今回、諸事情により研究の中断申請をさせて頂いたが、本成果をふまえ、次年度新たな内容で研究申請を行ない、FGFR1研究をつなげていきたい。

Five types of FGFR1 antibodies (abcam, sigma, abgent) were tested for authenticity of FGFR1 staining images. The results showed that there were antibodies and stereocilia in the same antigen recognition site (N end). FGFRI has been found to be structurally deficient and membrane penetration has been maintained. The mechanical stimulation capacity of secondary hairy cells is regulated by the use of light pigments. The inner ear organ culture of newborn pups (P2-5) was conducted by adding FM1- 43 to the culture medium at 2 weeks. AM1-43(for PFA fixation) was used to control the growth and development of hairy cells. The shape of stereocilia is abnormal, and the function is abnormal. Future research opportunities are reviewed and evaluated for long-term results. The results of immunoprecipitation of pcdh15 antibody in inner ear snails (E10 ; sterocilia formation stage), the interaction of filaminA(sterocilia) and pcdh15: Ramakrishnan NA et al, J Biol Chem. 2012) The possibility of FGFR 1 complex formation was demonstrated by direct interaction of pcdh15 and FGFR 1. Now, Pcdh15-Tg2742(nul1)(Case Western Reserve Univ. Kumar) This year, the research interruption application for all kinds of things, the research results, the new research application for the next year, the FGFR1 research