ＭｉｄｋｉｎｅおよびＰｌｅｉｏｔｒｏｐｈｉｎによる造血幹細胞の自己複製

Midkine(MK)およびPleiotrophin (PTN) 欠損マウスのin vivoでの解析に重点を置き、造血系への両遺伝子の影響を解析した。MKおよびPTNを欠損した成体マウスの骨髄から単核細胞を密度勾配遠心により分類した。このような単離された単核細胞に細胞表面に対する抗体で染色を行った。フローサイトメーターによってT細胞やマクロファージといったような分化した血球細胞で発現する分子が発現しておらずc-Kit、Sca-1が発現している細胞（LSK細胞）にゲートをかけ、さらにいくつかの表面分子の発現の組み合わせから未分化な造血幹細胞をソーティングした。この造血幹細胞を放射線照射したレシピエントマウスに移入し、造血再構築能を検討している。また、欠損マウスに野生型の造血幹細胞を連続骨髄移植 後の生着率の検討を行うことでニッチによる幹細胞自己複製能の制御を評価することを検討している。一方でMKおよびPTNを欠損した成体マウスから単離したニッチ細胞（骨芽細胞や血管系細胞）と野生型の造血幹細胞を共培養し、造血幹細胞の動態を検討している。ニッチ細胞についてはタング ステンブレードを用いた新鮮骨切片を用いて、形態学的評価もおこなっている。今後は欠損マウスの表現型をもとにしつつマイクロアレイ解析等の遺伝子発現解析を行うことでこれら分子の作用機序の分子機構を明らかにしていくことが期待される。また、これまでにMKおよびPTNの下流にPI3キナーゼシグナル経路が作用していることが報告されており、造血幹細胞制御におけるPI3キナーゼの関わりという側面にもアプローチしていくことが期待される。

Midkine(MK)およびPleiotrophin (PTN) 欠損マウスのin vivoでの解析に重点を置き、造血系への両遺伝子の影響を解析した。MKおよびPTNを欠損した成体マウスの骨髄から単核細胞を密度勾配遠心により分類した。このような単離された単核細胞に細胞表面に対する抗体で染色を行った。フローサイトメーターによってT細胞やマクロファージといったような分化した血球細胞で発現する分子が発現しておらずc-Kit、Sca-1が発現している細胞（LSK細胞）にゲートをかけ、さらにいくつかの表面分子の発現の組み合わせから未分化な造血幹細胞をソーティングした。この造血幹細胞を放射線照射したレシピエントマウスに移入し、造血再構築能を検討している。また、欠損マウスに野生型の造血幹細胞を連続骨髄移植 後の生着率の検討を行うことでニッチによる幹細胞自己複製能の制御を評価することを検討している。一方でMKおよびPTNを欠損した成体マウスから単離したニッチ細胞（骨芽細胞や血管系細胞）と野生型の造血幹細胞を共培養し、造血幹細胞の動態を検討している。ニッチ細胞についてはタング ステンブレードを用いた新鮮骨切片を用いて、形態学的評価もおこなっている。今後は欠損マウスの表現型をもとにしつつマイクロアレイ解析等の遺伝子発現解析を行うことでこれら分子の作用機序の分子機構を明らかにしていくことが期待される。また、これまでにMKおよびPTNの下流にPI3キナーゼシグナル経路が作用していることが報告されており、造血幹細胞制御におけるPI3キナーゼの関わりという側面にもアプローチしていくことが期待される。