乳がんのエストロゲン細胞膜受容体GPR30変異を持つ染色体導入Tgマウスの解明

乳腺癌雌激素细胞膜受体 GPR30 突变染色体转基因 Tg 小鼠的阐明

• 批准号: 24791380
• 负责人: 高村 歩美
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-24791380/
• 关键词: 実験外科学; エストロゲン; GPR30

エストロゲンの受容体は、核内受容体と細胞膜受容体に分類される。その作用は、核内受容体を介した遺伝子発現調節のみでは説明できないため、細胞膜受容体の探索が行われてきた。最近、細胞膜に存在するG protein-coupled receptor 30(GPR30)が発見され、予後の悪い卵巣・子宮ガンでその発現量に有意な増加や変異があることを見出した。GPR30の生理機能と疾患との関連性を明らかにするために、変異を持つ発現ベクターを用いたin vitro、in vivo解析を行う事を本研究の目的とした。まず、転写活性など生理的環境を整えるために正常型と変異型を安定に発現するBAC(bacterial artificial chromosome)ベクターの作製を行った。現在はこれらのBACベクターを用いたTgマウス作出に向けて維持管理中である。また、GPR30の生理機能を調べるために、Gタンパクの同定を行った。GPR30発現ベクターと種々のGタンパク発現ベクターを共発現させて、エストロゲン刺激時の細胞応答を測定することで、どのシグナル経路を介して作用するのかを調べた。今回用いたGタンパク発現ベクターは、刺激により活性化すると細胞内カルシウムを上昇させるキメラ型を用いた。つまり、fura-2を用いたカルシウムイメージングにより、GPR30がどのGタンパクを介しているのかが特定される。その結果、αサブユニットに分類されるGqを活性化することが示された。Gqは、ホスホリパーゼCを活性化しIP3を産生する。IP3によるカルシウム濃度変化により、血管収縮が制御される。閉経後のエストロゲンの減少とエストロゲン受容体GPR30発現の上昇が、どのように疾患に関与しているのか未解明な点が多い。本研究で明らかとなったGqを介したシグナル経路と病態との関連性を明らかにすることが今後の課題である。

雌激素受体分为核和细胞膜受体。单独通过核受体调节基因表达无法解释这种影响，因此已经进行了细胞膜受体的搜索。最近，发现了细胞膜中存在的G蛋白偶联受体30（GPR30），发现卵巢和子宫癌的表达水平显着增加或突变，预后不良。这项研究的目的是使用突变体表达矢量进行体外和体内分析，以阐明GPR30生理功能与疾病之间的关系。首先，为了调节诸如转录活性之类的生理环境，制备了稳定表达正常形式的BAC（细菌人造染色体）载体。当前，使用这些BAC载体生产TG小鼠的维护正在进行中。另外，确定G蛋白以研究GPR30的生理功能。通过与各种G蛋白表达载体共表达GPR30表达载体，我们研究了通过测量雌激素刺激时细胞反应作用的信号途径。本文中使用的G蛋白表达载体是一种嵌合形式，当通过刺激激活时会增加细胞内钙。换句话说，使用FURA-2的钙成像确定介导的G蛋白GPR30是介导的。结果表明它激活了GQ，该GQ被归类为α亚基。 GQ激活磷脂酶C并产生IP3。 IP3引起的钙浓度的变化控制血管收缩。许多未知数仍有待理解的绝经后雌激素减少和雌激素受体GPR30表达如何参与疾病。未来的挑战是阐明本研究中揭示的GQ介导的信号途径和病理之间的关系。