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滑膜肉腫特異的融合遺伝子の機能解析および肉腫宿主細胞の相互作用の検討

滑膜肉瘤特异性融合基因的功能分析及肉瘤-宿主细胞相互作用的研究

基本信息

批准号：
24791543
负责人：
竹中聡
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-24791543/
关键词：
滑膜肉腫融合遺伝子腫瘍微小環境 In vivo imaging

项目摘要

滑膜肉腫特異的な融合遺伝子SS18-SSXの機能解析として、これまで我々はSS18-SSX特異的なsiRNAを滑膜肉腫細胞に導入することにより細胞形態が変化することを発見し報告した。しかし、SS18-SSXの発現抑制が一過性であること、siRNAの導入効率が100%でないことから厳密な機能解析が困難であった。今回、テトラサイクリン投与によりSS18-SSX1に特異的なshRNAを発現することができるコンストラクトを作成し、患者検体より樹立した滑膜細胞株にウイルスを用いてこのコンストラクトを導入し、テトラサイクリンの投与によりSS18-SSXの発現量が低下することを確認することができた。この系においても、以前に報告した通りSS18-SSXの発現抑制による細胞形態の変化を生じた。今後、このコンストラクトの安定発現株を樹立することで、厳密なSS18-SSXの機能解析を行う予定にしている。また、これまで我々は皮下移植によって高率に肺転移をきたす骨肉腫細胞株LM8を樹立し、肺転移の成立初期にNFkbシグナルが重要であることを報告してきたが、肺転移成立およびその後の増大において、肺の微小環境がどのような役割を果たすかは不明である。今回、LM8にLuciferaseおよびGFPをウイルスを用い、安定的に導入した細胞株を樹立することで腫瘍細胞を可視化することに成功した。この細胞はもとのLM8と同様に皮下移植によって高率に肺転移を生じることを確認しており、この細胞を用いることで腫瘍細胞と宿主細胞との区別がIn vitroおよびIn vivoの生体内でも観察が可能となった。今後この細胞を用いることで肉腫肺転移における腫瘍細胞と宿主細胞の相互作用の解析を行う予定にしている。

Functional analysis of SS18-SSX, a synovial sarcoma specific fusion gene, was reported. SS18-SSX specific siRNA was introduced into synovial sarcoma cells. The expression inhibition of SS18-SSX was transient, and the efficiency of siRNA introduction was 100%. In this paper, we confirm that the expression of SS18-SSX specific shRNA is lower than that of SS18-SSX in patients with synovial cell lines. This is the first time that SS18-SSX has been reported. In the future, the stability of SS18-SSX will be established and the function analysis of SS18-SSX will be determined. The high rate of lung metastasis in subcutaneous transplantation was reported in the early stages of lung metastasis. Now, LM8 Luciferase and GFP were successfully introduced into the cell line. The difference between the cells and the host cells is in vitro and in vivo. In the future, the analysis of the interaction between the tumor cell and the host cell will be determined.