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細胞核由来DNAによる自然免疫応答賦活化の可能性についての検討

检查细胞核来源的 DNA 激活先天免疫反应的可能性

基本信息

批准号：
25870038
负责人：
柳澤悟
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2014-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-25870038/
关键词：
Toll Like Receptor 9 COPD PAMP DAMP DNAﾒﾁﾙ化

项目摘要

今回、代表者は「DNAﾒﾁﾙ化阻害薬によって細胞核DNAﾒﾁﾙ化が減少すると炎症が惹起されるのか」、逆に「炎症反応時のｴﾋﾟｼﾞｪﾈﾃｨｯｸな反応により非ﾒﾁﾙ化DNAが増えると同じような結果が得られるか」について末梢血由来好中球を用いて検討を行った。1.まずPolymorphprepを用いることで末梢血からの好中球回収率/生存率が上がることをMTT assayや細胞染色により確認した。またDNAをDAMPとして認識するToll-Like Receptor 9 (TLR9)が好中球に発現していることをWestern blottingにより確認した。このうえでTLR9ｱｺﾞﾆｽﾄであるODN2395を好中球に添加し、陽性ｺﾝﾄﾛｰﾙとしての好中球活性化を確認した。TLR9刺激はNF-κBを介してInterleukin-8(IL-8)産生を促すことが以前に報告されており、実際にODN2395添加によりIL-8産生亢進が確認された。2.次に、DNAﾒﾁﾙ化阻害薬であるRG108単独刺激による細胞応答性の変化についてIL-8を指標に評価した。MTT assayによると24時間のRG108刺激(0～100μM)で好中球のViabilityに影響はなかったが、RG108の濃度が高くになるほどIL-8産生は低下した。この傾向は、好中球を活性化するLipopolysaccharideの前刺激で顕著となり、DNAﾒﾁﾙ化の程度が炎症反応に影響することを示唆した。3.上記の反応は、TLR9のｱｺﾞﾆｽﾄであるODN2395の前投与により減弱した。すなわちODN2395の前投与によりTLR9刺激系を飽和しておくとRG108によるDNAﾒﾁﾙ化阻害は炎症惹能を発揮できないことがわかった。4.今後の検討課題としては(1)炎症の場で実際にDNAﾒﾁﾙ化酵素の発現や活性が変化していること、加えて(2)TLR9刺激系のMain Sourceが核由来DNAであることを確認する必要がある。

Today, the representative said,"DNA synthesis inhibitor reduces nuclear DNA synthesis and causes inflammation," and conversely,"anti-inflammation inhibitor increases non-nuclear DNA synthesis and results in inflammation," and the origin of peripheral blood is discussed. 1. Polymorph prep was used to determine the recovery rate/survival rate of peripheral blood and MTT assay. DAMP is recognized by Toll-Like Receptor 9 (TLR9) and Western blotting is performed. TLR9 TLR9 stimulation promotes Interleukin-8(IL-8) production through NF-κB activation, as previously reported, and the addition of ODN2395 confirms IL-8 production. 2. In addition, the expression of IL-8 was evaluated by the expression of RG108 in response to cellular stimulation. MTT assay at 24 hours of RG108 stimulation (0~100μM), good in sphere Viability, RG108 concentration is high, IL-8 production is low. The tendency of lipolysaccharide to be activated and the degree of DNA degradation to be affected by inflammation are indicated. 3. On the record, TLR9 is the first to drop and the second to drop. ODN2395 and TLR9 stimulate the system saturation, RG108 and DNA degradation to inhibit inflammation. 4. Future research topics include: (1) the development and activation of DNA enzymes in the inflammatory field;(2) the Main Source of TLR9 stimulation system; and (3) the necessity of confirming the nuclear-derived DNA.