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組換えプロテオリポソーム作製技術を用いた新しいドラッグデリバリーシステムの構築

利用重组蛋白脂质体生产技术构建新型药物递送系统

基本信息

批准号：
08J04817
负责人：
神谷厚輝
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでに細胞間接着タンパク質であるカドヘリン(CDH2)をバキュロウイルス発現系で出芽ウイルスエンベロープ膜上へ発現させ、カルシウムイオンに依存しCDH2の接着能を確認した。さらに、CDH2を持った出芽ウイルスとリポソームを融合させCDH2リポソームを作製した。カルシウムイオンに因るCDH2リポソームの接着能の観察に成功している。そこで、このCDH2リポソームの細胞内取り込みを、CDH2を特異的に発現しているヒトグリア芽腫細胞(LN-229 cell)を用い検討した。LN-229 cellにCDH2リポソーム(平均直径150nm)を播種後、共焦点レーザー顕微鏡にて観察した。細胞表面上にCDH2リポソームの存在を確認した。さらに、anti-CDH2抗体を用い細胞表面に存在するCDH2をブロッキングした後にCDH2リポソームを播種したところ、細胞表面上にCDH2リポソームの存在が確認されなかった。よって、CDH2リポソームとLN-229 cellの相互作用はCDH2によるものであると考えられる。次に、CDH2リポソームの細胞内への取り込みを観察する為に、エンドサイトーシス用プローブとCDH2リポソームの細胞内での局在を共焦点レーザー顕微鏡で可視化した。播種後1時間では、エンドサイトーシス用プローブとCDH2リポソームが共局在しているが、播種後4時間では共局在の割合が減少した。これは、リポソームがエンドソーム膜と融合を引き起こしたと考えられる。さらに、CDH2リポソームの細胞への取込み経路を確定するために、種々のエンドサイトーシス阻害剤を細胞へ添加しCDH2リポソームの取込み挙動を観察した。CDH2リポソームは様々なエンドサイトーシス経路で細胞内へ取込まれていることが確認された。よって、膜タンパク質の機能を利用した新しいドラックキャリアが構築できた。

The adhesion between cells depends on CDH2, and the adhesion between cells depends on CDH2. CDH2 is the most important component of the system. CDH2 is the most effective way to monitor the adhesion of CDH2. In this study, CDH2-specific expression was detected in the cell line LN-229. LN-229 cell CDH2 complex (average diameter 150 nm) after seeding, confocal microscopy The presence of CDH2 complex on the cell surface was confirmed. The presence of CDH2 on the surface of cells with anti-CDH2 antibodies was confirmed by seeding CDH2 molecules on the surface of cells The interaction between CDH2 and LN-229 cells CDH2 is the most important component of the system. 1 time after sowing, the total number of seeds is reduced, and 4 time after sowing, the total number of seeds is reduced. This is the first time I've ever seen a film that's been mixed up with a film that's been mixed up. In addition, CDH2 is a kind of cell protection system, which can be used to detect the activity of CDH2. CDH2 is the most important part of the cell cycle. In addition, the function of film quality can be utilized to build a new and clean film.