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アフリカツメガエル卵母細胞内母性mRNAの翻訳を制御するmRNP複合体の機能解析

爪蟾卵母细胞中控制母体 mRNA 翻译的 mRNP 复合物的功能分析

基本信息

批准号：
08J07275
负责人：
中村依子
金额：
$ 1.02万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、アフリカツメガエル卵母細胞のmRNP構成タンパク質を解析し、卵母細胞における母性mRNAの翻訳制御機構を明らかにすることを目的としている。これまで、カエル卵母細胞内の貯蔵mRNP複合体の新規構成分子としてP100タンパク質に注目し、その機能解析を行った。今年度は、P100が卵成熟の進行に必要な特定の母性mRNAの翻訳を制御していることを確かめるための解析を行った。カエルでは、卵成熟に必要な母性mRNAは3'UTR内の配列がmRNAの翻訳を制御していることがすでにわかっているため、卵成熟に必要な母性mRNAの3'UTRと連結したレポーターmRNAを作製し、P100がどのレポーターmRNAの翻訳を抑制するかを調べた。また、抗P100抗体を用いて、卵母細胞抽出液からの免疫沈降とマイクロアレイ(またはRT-PCR)を組み合わせ、P100が卵成熟に必要な特定の母性mRNAに結合しているのかどうかを解析した。さらに、P100は卵成熟が開始すると消失し、mRNAの翻訳を抑制する働きを持つので、P100は、卵成熟が開始すると翻訳が活性化される特定の母性mRNAの翻訳を抑制しているのではないかと考え、P100を過剰発現させた卵母細胞にプロゲステロン処理をして、卵成熟の間翻訳が活性化される母性mRNAの翻訳が抑制されるかを調べた。これらの結果、卵成熟過程において、P100は卵母細胞内で卵成熟の進行に必要な特定の母性mRNAに結合して、その翻訳が活性化するのを抑制することが示唆された。これまでの成果を論文にまとめ、現在学会誌に投稿中である。

In this study, the mRNP of oocytes was analyzed, and the maternal mRNA of oocytes was analyzed. The molecular structure of the new regulation of the mRNP complex of the oocytes and oocytes is that the P100 cells pay close attention, and the machines can analyze the genes. It is necessary for this year's oocyte maturation and P100 oocyte maturation to be carried out in a specific maternal mRNA to make sure that the oocyte maturation is analyzed. Essential for maternal mRNA, essential for egg maturation, maternal mRNA for mRNA, essential for egg maturation, maternal mRNA for reversion, suppression of mRNA for oocyte maturation, maternal UTRP for essential oocyte maturation. The combination of anti-P100 antibody, anti-P100 antibody, oocyte extract and immune sedimentation RT-PCR (immune sedimentation RT-PCR) and P100 oocyte maturation are necessary for specific maternal mRNA. Pregnancy, P100 oocyte maturation begins to fail, mRNA reversion inhibits oocyte activation, P100 activation, specific maternal mRNA reversion, P100 abortion, P100 abortion, oocyte activation, pregnancy, pregnancy The activation of the egg maturation cycle and the maternal mRNA inhibition of the egg maturation cycle. The results of the experiment, the process of oocyte maturation and the intracellular maturation of P100 oocytes showed that it was necessary to combine the specific maternal mRNA and the activation of the oocyte. We are now in the process of submitting contributions to the Institute.