新規LRR型受容体CLS1を介したCLV3/CLEシグナル伝達機構の解析

新型LRR型受体CLS1介导的CLV3/CLE信号机制分析

基本信息

批准号：
08J09726
负责人：
木下温子
金额：
$ 1.15万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J09726/
关键词：
CLV3 茎頂分裂組織 LRR-RLK シグナル伝達

项目摘要

サプレッサースクリーニングで得られたCLV3 peptide suppressor; cls1は強いCLV3ペプチド耐性を示し、またその原因遺伝子はLRR型受容体様キナーゼをコードするRPK2と同一であることを前年度までに明らかにしてきた。本年度は、RPK2の機能を詳細に解析するため、遺伝学的解析を行い、その結果を論文にまとめ、Development誌に発表した。また、新規の変異体cls2に関しても、マップベースクローニングを行い、原因遺伝子の探索を行った。1.茎頂分裂組織において、RPK2の機能する領域を明らかにするため、RPK2、CLV3、WUSプロモーターの下流でRPK2とGFPの融合タンパク質を発現するコンストラクトを作出し、rpk2変異体背景に導入した形質転換体を作出した(それぞれpRPK2::RPK2-GFP、pCLV3::RPK2-GFP、pWUS::RPK2-GFP)。その結果、pRPK2::RPK2-GFP形質転換体、pCLV3::RPK2-GFP形質転換体において、rpk2の表現型を相補する様子が観察され、このことから、RPK2はCLV3の発現する領域において機能することが予想された。しかしながら、蛍光顕微鏡によるGFPの局在解析、およびin situ hybridizationによるmRNAの発現解析の結果、pCLV3::RPK2-GFP形質転換体において、RPK2-GFPはCLV3の発現領域のみならず茎頂分裂組織の広い領域に分布していることが明らかになった。したがって、茎頂分裂組織におけるRPK2の機能部位、およびRPK2の発現制御を明らかにするためには、より精密に制御された条件下での実験が必要であると考えられる。2.cls2突然変異体はFOX lineを用いたスクリーニングにより、CLV3ペプチド耐性を指標にとられた変異体である。cls2は単一劣性変異体であり、マップベースクローニングの結果その原因遺伝子は第2染色体の下腕約230kbの領域に存在することが明らかとなった。この領域内の遺伝子配列を、次世代シーケンサーにより解析したところ、Plant U-box proteinをコードするAt2g23140のイントロン-エキソン境界領域において一塩基置換が見いだされた。今後は、この遺伝子が原因遺伝子である可能性を検証するため、相補性試験、およびアレリズムテストを行う予定である。

上一年已经揭示了CLV3肽抑制剂。通过抑制剂筛选获得的CLS1表现出强大的CLV3肽耐药性，其致病基因与RPK2相同，RPK2编码了LRR受体样激酶。今年，为了详细分析RPK2的功能，我们进行了遗传分析，在论文中编写了结果，并将其发布在开发期刊上。此外，对新型突变体CLS2进行了基于地图的克隆以寻找因果基因。 1。在词干基质生物列表中，创建了RPK2，CLV3和WUS启动子的rpk2-GFP融合蛋白的构建体，并将转化因子引入RPK2突变体的背景（PRPK2 :: rpk2-gfp，rpk2-gfp，pclv3 :: rpk2-gfp，pclv3 :: rpk2-gfp，pwus and pwus :: rpk2-gf2 gf， PWUS :: RPK2-GFP）。结果，观察到PRPK2 :: RPK2-GFP转化体和PCLV3 :: RPK2-GFP转化体互补了RPK2的表型，因此，从中可以预测RPK2在表达CLV3的区域中起作用。然而，使用原位杂交使用荧光显微镜和mRNA表达分析对GFP进行定位分析表明，在PCLV3 :: RPK2-GFP转化体中，RPK2-GFP不仅在Clv3表达区域中分布在CLV3表达区域中，而且在远离属性的近代区域中也分布。因此，人们认为，在更精确的控制条件下进行实验是为了阐明词干顶分生组织中RPK2的功能部位和RPK2表达的调节。 2。CLS2突变体是一种突变体，通过使用FOX线筛选来指示CLV3肽耐药性。 CLS2是一个单一的隐性突变体，基于地图的克隆表明其致病基因位于2染色体2的下臂的大约230 kb的区域。该区域内的基因序列通过下一代测序仪和单基碱基的替代品，在Interon-exon-exon-exon-exon-exon-exon bote int2g23140 selts putn puttion中被发现。将来，将进行互补性和过敏检验，以验证该基因是致病基因的可能性。