A novel PVDF membrane for on-membrane identification of gel-resolved proteins by mass spectrometry

一种新型 PVDF 膜，用于通过质谱法对凝胶解析蛋白质进行膜上鉴定

• 批准号: 20310121
• 负责人: HIRANO Hisashi
• 金额: $ 12.48万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20310121/
• 关键词: タンパク質; 翻訳後修飾; プロテインチップ; 質量分析装置; 癌

In the 1990s, techniques were developed to transfer proteins from gels onto PVDF membranes, and to identify the proteins on the membranes by MALDI-MS. However, the low ionization efficiency of peptides and proteins immobilized on the membranes often renders these techniques useless. Therefore, it is essential to develop membranes on which peptides and proteins can be efficiently ionized for MS analysis. In this study, we found that 0.1-μm pores PVDF membranes can be used for highly efficient and effective electroblotting and MALDI-MS analysis. This membrane showed high ion yield in MALDI-MS analysis of peptides compared to conventional PVDF membranes. In all, 38 yeast proteins with various physicochemical characteristics were separated by 2-DE, immobilized onto the 0.1-μm pore PVDF membranes, and successfully identified by MALDI-MS/MS.

20 世纪 90 年代，开发了将蛋白质从凝胶转移到 PVDF 膜上的技术，并通过 MALDI-MS 识别膜上的蛋白质。然而，固定在膜上的肽​​和蛋白质的低电离效率通常使得这些技术毫无用处。因此，开发能够有效电离肽和蛋白质以进行质谱分析的膜至关重要。在这项研究中，我们发现0.1微米孔径的PVDF膜可用于高效且有效的电印迹和MALDI-MS分析。与传统的 PVDF 膜相比，该膜在肽的 MALDI-MS 分析中显示出较高的离子产率。通过 2-DE 分离了 38 种具有不同理化特性的酵母蛋白，将其固定在 0.1 μm 孔的 PVDF 膜上，并通过 MALDI-MS/MS 成功鉴定。

项目成果

Mutagenesis of longer inserts by the ligation of two PCR fragments amplified with a mutation primer.

通过连接用突变引物扩增的两个 PCR 片段来诱变较长的插入片段。

• DOI: 10.1016/j.jbiosc.2008.09.003
• 发表时间: 2009
• 期刊: Journal of bioscience and bioengineering
• 影响因子: 2.8
• 作者: Y. Kato;Noriaki Arakawa;Yusuke Masuishi;H. Kawasaki;H. Hirano
• 通讯作者: H. Hirano

タンパク質の事典 東京

东京蛋白质百科全书

• 发表时间: 2008
• 作者: Yamane H.;Konno K.;Takabayashi J.;Sassa T.;Oikawa H.;Elsevier;Minoru Ueda;平野 久;Oikawa H.;平野久
• 通讯作者: 平野久

ホームページ

主页

Proteomics for CO- and post-translational modifications of the yeast 26S proteasome

酵母 26S 蛋白酶体 CO 和翻译后修饰的蛋白质组学

• 发表时间: 2008
• 作者: Hirano;H.
• 通讯作者: H.

Proteomic analysis of membrane proteins expressed specifically in pluripoten stem cells

多能干细胞中特异表达的膜蛋白的蛋白质组学分析

• 发表时间: 2009
• 期刊: Proteomics 9
• 作者: Itoh;A.;Kurisaki;A.;Yamanaka;Y.;Hirano;H.;Fukuda;H.;Sugino;H.;Asashima;M
• 通讯作者: M