膵臓導管細胞に機能発現する内向き整流性KチャネルのKイオン依存性活性化機構

胰腺导管细胞中功能表达的内向整流钾离子通道的钾离子依赖性激活机制

• 批准号: 20790181
• 负责人: 林 美樹夫
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Kansai Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20790181/
• 关键词: 膵臓; 導管細胞; 内向き整流性Kチャネル; Kイオン; パッチクランプ法; 免疫組織化学法

膵臓導管細胞に機能発現する内向き整流性Kチャネル(Kir2.0)の分子基盤および細胞外Kイオン依存性活性化機構を明らかにするため、導管細胞におけるKir2.0蛋白の分布を調べるとともに、チャネル機能に影響する抗体の作製を試みた。ラットから膵臓導管を遊離し、抗cytokeratin20および抗CFTRモノクローナル抗体を用いた免疫組織化学法により導管細胞を同定した。そして、介在部導管または小葉内導管細胞にKir2.1、Kir2.2、およびKir2.4蛋白の発現を認めた。また、Kir2.1蛋白の細胞外領域に位置するアミノ酸配列(CVTDECPIA)を抗原とする抗Kir2.1ポリクローナル抗体を作製した。そしてKir2.1を強制発現させたHEK293細胞から蛋白を抽出し、ウェスタンブロッティング法で抗体の特異性を確認した。さらに免疫組織化学法により、Kir2.1強制発現細胞におけるKir2.1蛋白の細胞膜への局在性を認めた。しかし、パッチクランプ法によるホールセル電流測定において、この抗体はKir2.1電流を遮断できなかった。以上の結果から、Kir2.0蛋白がホモまたはヘテロでチャネルを構成し膵臓導管細胞に機能発現している可能性が示唆された。また、Kir2.1蛋白の細胞外領域に位置するアミノ酸残基がチャネル活性化に関与する証拠は抗Kir2.1ポリクローナル抗体を用いた機能解析からは得られなかった。今後は、この抗体を断片化したFabを用いた機能解析が期待される。

Cui viscera function of duct cells に 発 now す る introverted き rectifier sex K チ ャ ネ ル molecular base plate (Kir2.0) の お よ び extracellular K イ オ ン dependency activeness institutions を Ming ら か に す る た め, duct cells に お け る Kir2.0 protein の distribution を adjustable べ る と と も に, チ ャ ネ ル function に influence す る を try the antibody の cropping み た. Crucial ラ ッ ト か ら Cui catheter を free し, resisting cytokeratin20 お よ び resistance CFTR モ ノ ク ロ ー ナ を ル antibody with い た immune histochemical methods に よ り を duct cells with fixed し た. そ し て, medium in catheter ま た は duct cells within the lobule に Kir2.1, Kir2.2, お よ び Kir2.4 protein の 発 を now recognize め た. ま た, の Kir2.1 protein, extracellular domain に position す る ア ミ ノ acid with column (CVTDECPIA) を antigen と す る resistance Kir2.1 ポ リ ク ロ ー ナ ル antibody を cropping し た. そ し て Kir2.1 を forced 発 now さ せ た HEK293 cells か ら protein を drew し, ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ method の で antibody specificity を confirm し た. さ ら に immune histochemical methods に よ り, compulsory 発 Kir2.1 now cells に お け る Kir2.1 の cell membrane protein へ の bureau at sex を め た. し か し, パ ッ チ ク ラ ン プ method に よ る ホ ー ル セ ル rheometry に お い て, こ の antibody は Kir2.1 current を interrupt で き な か っ た. の above results か ら, Kir2.0 protein が ホ モ ま た は ヘ テ ロ で チ ャ ネ ル を constitute し Cui viscera に duct cells function 発 now し て い が る possibility in stopping さ れ た. ま た, の Kir2.1 protein, extracellular domain に position す る ア ミ ノ acid residues が チ ャ ネ ル activeness に masato and す る card 拠 は resistance Kir2.1 ポ リ ク ロ ー ナ を ル antibody with い た function analytical か ら は must ら れ な か っ た. In the future, the を and <s:1> <s:1> antibodies will be fragmented, the たFabを will be dissected by the <s:1> た function, and the が is expected to be される.