腸内細菌のシグナルがYKL-40を介して大腸癌悪性化に関与する機構の解析

YKL-40解析肠道细菌信号参与结直肠癌恶性的机制

• 批准号: 20790493
• 负责人: 河田 真由美
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20790493/
• 关键词: 大腸癌; 腸内細菌; YKL-40; CHI3L1

(1)ヒト大腸癌臨床検体を用いてYKL-40/CHI3L1の免疫染色を行ったところ、癌細胞、その周囲の間質にある炎症細胞、血管内皮細胞に発現を認めた。(2)正常大腸粘膜と大腸癌検体からYKL-40/CHI3L1のmRNAを抽出し、RT-PCR法で比較したところ大腸癌において発現が亢進していた。(3)ヒト大腸癌細胞株からYKL-40/CHI3L1のmRNAを抽出しRT-PCR法で確認したところSW480,LoVoにおいて高発現していたが、HT29,DLD-1では発現していなかった。(4)ヒト大腸粘膜から採取したmRNAを用いてYKL-40/CHI3L1の全長をコードする二重鎖DNAを合成し、発現ベクターpcDNA4.0に組み込んだ。(5)(4)で作成したベクターを大腸細胞株に遺伝子導入し蛋白発現していることを蛍光免疫染色法とWestern blotting法にて確認した。(6)コンピューター解析によりYKL-40/CHI3L1の活性を特異的に阻害する部位を検索しsmall interference(si)RNAを作成した。以上の結果よりYKL-40/CHI3L1はヒト大腸癌にて発現が亢進し悪性化に関与していると考えられる。今後、腸内細菌を感染させてYKL-40/CHI3L1の標的遺伝子をマイクロアレイ法を用いて明らかにし、また大腸癌の進展に関与するとされるbeta-catenin,STAT3などとのシグナル経路との関係を検討する予定である。

(1)Immunostaining of YKL-40/CHI3L1 in colorectal cancer was used to detect inflammatory cells and vascular endothelial cells in colorectal cancer. (2)Expression of YKL-40/CHI3L1 mRNA in normal colorectal mucosa and colorectal cancer tissues was compared by RT-PCR. (3)The mRNA of YKL-40/CHI3L1 was extracted from colorectal cancer cell lines and confirmed by RT-PCR. SW480,LoVo, HT29,DLD-1 were highly expressed. (4)The full-length DNA of YKL-40/CHI3L1 was synthesized and found in pcDNA4.0. (5)(4) The protein expression of the gene introduced into the colon cell line was confirmed by light immunostaining and Western blotting. (6)YKL-40/CHI3L1 activity was analyzed and a small interference(si)RNA was created. YKL-40/CHI3L1 is the first type of colorectal cancer to be diagnosed. In the future, intestinal bacterial infection with YKL-40/CHI3L1 target gene will be investigated using the beta-catenin, STAT3 and its relationship with the progression of colorectal cancer.