内耳有毛細胞における新規カルシウムチャネルの機能解析

内耳毛细胞新型钙通道的功能分析

• 批准号: 20791211
• 负责人: 稲垣 彰
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20791211/
• 关键词: 有毛細胞; カルシウム電流; T型カルシウムチャネル; 聴覚; パッチクランプ; ウエスタンブロット

外有毛細胞が低電位で保持されていることに注目し、ラット内耳から作成したcDNAライブラリーを用いて、低電位活性型カルシウムチャネルのプローブを作成しPCRを施行した。その結果、CaV3.1のみ検出され、CaV3.2、CaV3.3では反応が見られなかった。次にin sutu hybridizationを行ったところ、内外有毛細胞に発現が見られた。CaV3.1に対する特異抗体を用いて免疫染色を行ったところ、外有毛細胞に特異的にCaV3.1の発現が見られた。ウエスタンブロッティングをおこなったところ、過去に報告されているCaV3.1よりやや小さい総体質量をもつバンドが検出され、内耳特異型のバリアントが示唆された。このため、外有毛細胞の電位依存性カルシウム電流についてパッチクランプ法を用いて解析したところ、T型由来と思われる、一過性のカルシウム電流を検出した。この電流成分のkinetics解析、薬理学的な特性の解析をしたところ、過去に報告されているCaV3.1、T型カルシウムチャネルの性質と大きく矛盾しない結果が得られ、形態的に観察されたT型カルシウムチャネルが、機能的にも役割を果たしているものと考えられた。今後は内耳特異的なバリアントの検出と有毛細胞内のsubcellular localizationの検討を行う予定である。内耳特異的なバリアントの検出のため、ラット内耳由来のcDNAライブラリーからCaV3.1をPCR法を用いて増幅し、シークエンスをおこなったが、過去に報告のある脳型CaV3.1が検出された。最近、カルフォルニア大学デービス校より内耳特異的なT型カルシウムチャネルの報告があり、(J Neurophysiol. 2008 Oct ; 100(4) : 2287-99. )これらの報告がわれわれの検討と一致するかどうか、検討したいと考えている。

There is a low voltage cell outside the cell to keep a close eye on the device, the inner ear of the cell to make a cDNA device, and a low-voltage active device to make the PCR device. The results show that CaV3.1 has failed to detect errors, CaV3.2, and CaV3.3. In the second in sutu hybridization, there are hairy cells inside and outside. CaV3.1 specific antibodies were detected by immuno-staining with specific CaV3.1 antibodies with hairy cells. Please tell me that in the last few days, you have to pay attention to the situation. In the past, you have reported that you are not in a position to CaV3.1. In the past, you have been asked to measure the size of your body. Cell-dependent transmission, cell-dependent transmission, cell-dependent, current-dependent, cell-dependent, potential-dependent, cell-dependent, cell-dependent, current-dependent, current- The kinetics analysis of current components, the analysis of the characteristics of electrical current, the analysis of the characteristics of current, the analysis of the In the future, the inner ear will show that there is a hairy intracellular subcellular localization in the cell. The cause of the inner ear, the cDNA, the CaV3.1, the PCR, the CaV3.1, the report, the report. Recently, the university

项目成果

The Cav3.1 T-type Ca2+ channel contributes to voltage-dependent calcium currents in rat outer hair cells

• DOI: 10.1016/j.brainres.2008.01.058
• 发表时间: 2008-03-27
• 期刊: BRAIN RESEARCH
• 影响因子: 2.9
• 作者: Inagaki, Akira;Ugawa, Shinya;Shimada, Shoichi
• 通讯作者: Shimada, Shoichi