有毛細胞における新規カルシウムチャネルの単離

毛细胞中新型钙通道的分离

• 批准号: 18791224
• 负责人: 稲垣 彰
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18791224/
• 关键词: 内耳; 有毛細胞; 電位依存型カルシウムチャネル; 外有毛細胞; カルシウムチャネル; in situ hybridization法; 免疫組織化学法; PCR法

ラット内耳由来のESTライブラリーを使用して内耳に発現する電位依存方カルシウムチャネルの遺伝子のスクリーニングを行った。その結果,既存の遺伝子に加え,内耳での発現が知られていないT型カルシウムチャネルのひとつであるCaV3.1の遺伝子の発現が見られた。次にT型に属するCaV3.1,3.2,3.3に対するプライマーを作成し,コルチ器より抽出したmRNAを用いて,RT-PCR法を用いてラットコルチ器での発現を検討したところCaV3.1のmRNAのみが検出できた。In situ hybridization法を用いて,mRNAの局在を検討したところ,内外有毛細胞に発現が見られた。タンパクレベルでの発現を確認するため、Western blottingで内耳におけるタンパクの発現を検討したところ,抗CaV3.1抗体にて既知の小脳型CaV3.1よりやや分子量の小さい,内耳型CaV3.1と考えられるバンドを検出した。免疫組織化学法を用いて,内耳におけるタンパクの局在を検討したところ,外有毛細胞にのみ,CaV3.1タンパクの発現が見られ,内有毛細胞には見られなかった。この特徴はラットでは一過性の内向きカルシウム電流が外有毛細胞のみで観察され,内有毛細胞では観察されないという事実とよく符合するものと考えられた。この一過性内向き電流がT型の特性を有しているかどうかを検討するため,パッチクランプ法による検討を行った。一過性内向き電流は,holding potentialによる影響をうけ消失することから,低電位活性型の性質を持っていると考えられた。また,T型特異的阻害薬である低濃度mibefradilにより,可逆的に阻害できたことからもT型の性質を持っていると考えられた。以上の検討から,ラット外有毛細胞における一過性内向き電流はT型カルシウムチャネルを介する電流と考えられた。今後はin vivoでのカルシウムチャネルの役割について検討していきたい。

The potential dependence of the inner ear's development on EST activity is discussed in detail. As a result, the presence of existing genes was increased, and the occurrence of genes in the inner ear was detected. T-type genes CaV3.1, 3.2 and 3.3 were generated and mRNA was extracted from these genes. RT-PCR was used to detect mRNA in CaV3.1. In situ hybridization method, mRNA is detected in both internal and external hairy cells. Western blotting was used to detect the presence of CaV3.1 in the inner ear, and anti-CaV3.1 antibodies were detected in the known small CaV3.1 type with low molecular weight and in the inner ear CaV3.1 type with low molecular weight. Immunohistochemical method was used to detect the presence of CaV3.1 in the outer hairy cells and the presence of CaV3.1 in the inner hairy cells. The characteristic is that the current in the outer hairy cells is transient, and the current in the inner hairy cells is transient. The transient inward current is a T-shaped characteristic. The effect of transient electric current on the properties of low electric potential T-type specific resistance to mibefradil at low concentrations, reversible resistance to mibefradil at low concentrations, reversible resistance to mibefradil at low concentrations, and T-type properties. The above discussion is about the transient inward current in the outer hairy cells and the current in the T-shaped hair cells. Now, in vivo, we're going to have a discussion on how to do this.

项目成果

Acid-sensing ion channel-1b in the stereocilia of mammalian cochlear hair cells.

哺乳动物耳蜗毛细胞静纤毛中的酸敏感离子通道 1b。

• 发表时间: 2007
• 期刊: 第112回日本解剖学会総会 (学会発表)
• 作者: Hiyama E;et al.;Honda MJ;佐々木文章ほか;Sasaki F et al.;Ito A;Tanaka K;Hongo T;Ito A;Ito A;Niwa Y.(et al.);Ito Y.(et al.);Ito A.(et al.);Komeima K. (et al.);Kobayashi C. (et al.);Kito K.(et al.);Suzuki A.(et al.);Ishikawa K. (et al.);Chen GY.(et al.);Lin J.(et al.);Ueno S.(et al.);鵜川 眞也
• 通讯作者: 鵜川 眞也