Profiling and functional analysis of microRNAs in follicular granulosa cells and their clinical application

滤泡颗粒细胞microRNA谱分析、功能分析及其临床应用

• 批准号: 20591931
• 负责人: TAKESHITA Toshiyuki
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Nippon Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20591931/
• 关键词: 卵巣; 卵胞顆粒膜細胞; マイクロRNA; 生殖医学; microRNA

We performed large-scale profiling of microRNA (miRNAs) in human granulosa-derived cell lines (e.g., KGN) by high-throughput sequencing. In these cell lines, we found that miR-21 accounted for more than 80% of AGO2 (designated EIFC2) -bound miRNAs, suggesting that it played a central role as a functional miRNA in human GCs. We also performed cDNA cloning of AGO2-bound mRNAs in KGN cells and identified COL4A1 mRNA as a possible miR-21 target in KGN cells, which was corroborated by subsequent experimental validation. In proceeding in vitro functional studies using synthetic mimics of miRNA precursors or short-interference RNAs, we also found that these short double-strand RNAs (23- and/or 24-nucleotide dsRNAs) readily induced apoptosis in human granulosa cell tumor-derived cells but not in other cell types. Furthermore, we revealed that the short dsRNAs transcriptionally hyper-induce retinoic acid-inducible gene-I through dsRNA-activated protein kinase.

我们通过高通量测序对人颗粒来源细胞系（如KGN）中的microRNA （mirna）进行了大规模分析。在这些细胞系中，我们发现miR-21占AGO2（指定的EIFC2）结合miRNA的80%以上，这表明它在人类GCs中作为功能性miRNA发挥了核心作用。我们还对KGN细胞中ago2结合的mRNA进行了cDNA克隆，并鉴定出COL4A1 mRNA可能是KGN细胞中miR-21的靶点，并通过随后的实验验证证实了这一点。在使用合成miRNA前体或短干扰rna的模拟物进行的体外功能研究中，我们还发现这些短双链rna（23和/或24核苷酸dsRNAs）很容易诱导人颗粒细胞肿瘤来源细胞的凋亡，但在其他细胞类型中则不然。此外，我们发现短dsrna通过dsrna活化蛋白激酶转录超诱导维甲酸诱导基因i。

项目成果

RNA duplexes elicit interferon-independent apoptosis of ovarian granulosa cells via RIG-I in cell type- and length-dependent manner.

RNA 双链体通过 RIG-I 以细胞类型和长度依赖性方式引发卵巢颗粒细胞的干扰素非依赖性凋亡。

• 发表时间: 2010
• 作者: 石橋宰;et al
• 通讯作者: et al

ヒト卵巣顆粒膜細胞株(KGN)におけるmicroRNA発現プロファイルの解析

人卵巢颗粒细胞系 (KGN) 中 microRNA 表达谱分析

• 发表时间: 2008
• 作者: 間瀬有里;他
• 通讯作者: 他

ヒト卵巣顆粒膜細胞株に発現するmicroRNAの大規模プロファイリング解析

人卵巢颗粒细胞系中表达的 microRNA 的大规模分析

• 发表时间: 2009
• 作者: 間瀬有里;他
• 通讯作者: 他

MicroRNA (miRNA) cloning analysis reveals sex differences in miRNA expression profiles between adult mouse testis and ovary

• DOI: 10.1530/rep-08-0349
• 发表时间: 2008-12-01
• 期刊: REPRODUCTION
• 影响因子: 3.8
• 作者: Mishima, Takuya;Takizawa, Takami;Takizawa, Toshihiro
• 通讯作者: Takizawa, Toshihiro

短鎖2本鎖RNAはPKR、RIG-Iおよびp38を介し塩基数依存的にヒト卵巣顆粒膜細胞のアポトーシスを誘導する

短双链RNA通过PKR、RIG-I和p38以碱基数依赖性方式诱导人卵巢颗粒细胞凋亡

• 发表时间: 2009
• 作者: Morikawa S.;Sekiya S.;他;石橋宰
• 通讯作者: 石橋宰