ウイルスプロモーターからの外来遺伝子発現に対する糖の促進効果に関する研究

糖对外源基因病毒启动子表达促进作用的研究

• 批准号: 20656138
• 负责人: 荒尾 雄二郎
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20656138/
• 关键词: 糖; 糖鎖; 外来遺伝子; ウイルスプロモーター; 一過性発現促進; 細胞周期; 転写活性化; 緑色蛍光蛋白質; 遺伝子; ウイルス; プロモーター; 蛋白質; 発現; 制御; 促進

1 外来遺伝子発現に対する糖鎖の促進効果プルランを代表例として、CV-1細胞でのCMVプロモーター制御EGFP遺伝子の一過性発現に対する糖鎖の効果を調べると、濃度依存的に遺伝子発現を増加させ、12%で最大の効果を発揮した。プルラン以外の糖鎖である酵母マンナン、デキストラン、フルクトオリゴ糖、コンドロイチン硫酸でも有意な遺伝子発現増大効果が観察された。これらの知見は、本研究の応用性を広げるとともに、生物現象との共通性を示唆する点で重要である。2 ヘキソーストランスポーター(GLUT)が糖センサーであるか否かの検討GLUTを介して取込まれる蛍光グルコース類似体(2NBDG)を各種の糖の存在下でCV-1細胞に2時間取込ませ、2NBDG取込み量と各糖の外来遺伝子発現促進効果を比較したところ、糖濃度が100、500mMいずれの場合でも両者は相関しなかった。従って、GLUTは糖の遺伝子発現促進効果のセンサーではないと推定された。3 阻害剤等を用いた糖の促進機構の解析促進効果の高いラクチュロースと各種阻害剤を(1)の評価系で同時に作用させ、阻害剤の影響を検討した。ラクチュロースによる遺伝子発現増大は、G1阻害剤とG1/S阻害剤で低下し、G2/M阻害剤で相加的に増大した。従って、細胞周期、並びにそれ以外の因子の関与が推測され、その機構を解明する上で重要な手掛かりとなる。4 糖添加後早期における細胞内遺伝子発現状態の解析糖刺激早期(糖添加1時間後)におけるmRNAをマイクロアレイ法で解析した。その結果、RNAのスプライシング、結合、加工、代謝、並びにmRNAの代謝が活性化され、クロマチン、蛋白質-DNA複合体、及びヌクレオソームの集合状態が低下していると示唆された。添加後1時間以内にDNA構造体の乖離と転写の活性化が誘導されるというこの示唆は、その機構解明に大きな意義をもつ。

1. Representative examples of enhancing effect of exogenous gene expression on glyoclock include: 1. transient expression of CMV gene in CV-1 cells to inhibit EGFP gene expression on glyoclock; 2. concentration-dependent gene expression increased; and 12. percent of maximal effect was observed. The results of increased production of yeast, yeast, This study is important for understanding and understanding biological phenomena. 2. Comparison of the effects of glucose concentration and exogenous gene production promotion in CV-1 cells in the presence of various sugars by GLUT (2NBDG). The GLUT is a putative gene promoter for sugar production. 3. The analysis of the promotion mechanism of sugar in the use of inhibitors, etc. The evaluation system of various inhibitors (1) and the simultaneous action of inhibitors and the influence of inhibitors are discussed. G1 and G1/S barriers are lower, and G2/M barriers are higher. It is important to understand the relationship between factors other than the cell cycle and the mechanism. 4. Analysis of intracellular gene expression in the early stage after sugar addition (1 time after sugar addition) As a result, RNA gene expression, binding, processing, metabolism, and mRNA metabolism, activation, protein expression, protein-DNA complex, and protein expression are reduced. Within 1 time after addition, the DNA construct is isolated and activated, and the mechanism is explained.

项目成果

単純ヘルペスウイルス1型粒子による宿主細胞の活性化 : ウイルス粒子表面糖鎖の関与

1型单纯疱疹病毒颗粒激活宿主细胞：病毒颗粒表面糖链的参与

• 发表时间: 2009
• 作者: Pauliina NURMI;Bestamin OZKAYA;Keiko SASAKI;Anna H.KAKSONEN;M.-R.Riekkola-VANHANEN;Olli H.TUOVINEN;Jaakko A.PUHAKKA;荒尾雄二郎
• 通讯作者: 荒尾雄二郎

ウイルスプロモーターからの遺伝子発現に対する糖の増大効果

糖对病毒启动子基因表达的增强作用

• 发表时间: 2008
• 作者: 大久保学;難波ひかる;木村美幸;荒尾雄二郎
• 通讯作者: 荒尾雄二郎