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哺乳動物の精子の性差の分子基盤の解明

阐明哺乳动物精子性别差异的分子基础

基本信息

批准号：
20658064
负责人：
金井克晃
金额：
$ 2.05万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20658064/
关键词：
精子性染色体性化モデル動物性比

项目摘要

精子形成過程における精子のアレル差は、精巣内において円形精子細胞が分化する際に初めて生じる。円形精子細胞において、性染色体上の遺伝子群で、半数体で発現開始し、精子細胞間をつなぐ「細胞間橋」を容易に通過しにくい遺伝子産物であれば、その遺伝子発現によりX精子とY精子に差異が生じる。まず最初に、円形精子細胞以降の精子形成のアッセイ系を立ち上げるため、ヌードマウスの皮下への移植片において、長期にわたって安定的に半数体精子を産生する実験系の確立を行った。その結果、妊娠中期頃の胎子精巣を材料とし、中腎を一部残した状態での移植により、ヌードマウス皮下で恒常的に精子産生を行い、精巣上体精子まで産出可能な実験系の樹立に成功した。次に、精子のアレル差を誘導する発現ベクター候補について、既に報告されているHuファミリー遺伝子群の精子形成で発現解析を行った。その結果、HuRは、精母細胞、精子細胞に、HuBが、分化型の精祖細胞に発現していることが明らかとなった。また、これら2つのHu因子以外(HuC,HuD)は、精巣では顕著な発現が認められなかった。これらの結果は、Hu因子は、発現特異性ではなく、Hu蛋白の本来の機能で、アレル差が生じることが示唆され、そこで、精子間のHuR(RNA-binding protein)-EGFP融合キメラベクターを開発した。しかし、この開発の途中、アレル特異的な精子の排除の効率が極端に悪いことが判明し、Tcr遺伝子を用いたベクターが、mRNAレベルで「細胞間橋」を通過しにくい新たな知見が明らかとなった。これは、Tcr遺伝子の一部をHuR-EGFP融合ベクターに組み入れれば、本研究の狙いである「細胞間橋」を通過しにくい、精度の高いベクターとなることが強く示唆された。このため計画途中で、Tcr mRNAの3'-UTRをベクターに付加した新しいHuR-EGFP-Tct UTRベクターの開発に変更した。しかし、残念ながら、本ベクターによるアレル差を生じるTgマウスを樹立することは、現時点では成功していない。さらなるベクター改良による継続した研究が必要である。

Spermatogenesis is the process of sperm cell differentiation and development. The sperm cells in the shape of a circle, genetic subgroups on the sex chromosomes, the development of hemisomy, the "intercellular bridge" between sperm cells, the ease of passage of genetic products, the development of genetic products, the difference between X sperm and Y sperm. The initial, spherical sperm cells were used to establish a stable sperm production system for the development of sperm cells. The results showed that the sperm production of fetus in the second trimester of pregnancy was stable, and the sperm production of sperm in the upper body was successful. In addition, sperm loss induction, sperm formation candidate detection, and sperm formation analysis were reported. As a result, it is clear that HuR, spermatocytes, sperm cells, HuB, and differentiated sperm progenitor cells are discovered.また、これら2つのHu因子以外(HuC,HuD)は、精巣では顕着な発现が认められなかった。The results show that Hu factor is specific for expression, Hu protein is functional, and the expression of HuR(RNA-binding protein)-EGFP fusion protein in sperm is open. In the process of development, the efficiency of sperm elimination is extremely high. In the process of identification, Tcr gene is used in the process of identification, mRNA is used in the process of identification, and "intercellular bridge" is used in the process of identification. This study was conducted to identify the "intercellular bridge" between the two cells, and to identify the "intercellular bridge" between the two cells. In the middle of this project, the 3'-UTR of Tcr mRNA was added to the development of HuR-EGFP-Tct UTR. The difference between the two is that the current point is successful. It is necessary to improve the quality of the products.