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マウス生殖細胞の分化過程に伴うSox17遺伝子の機能調節機構の解析

Sox17基因在小鼠生殖细胞分化过程中的功能调控机制分析

基本信息

批准号：
07660412
负责人：
金井克晃
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07660412/
关键词：
Sox 精子発生マウス

项目摘要

Sox17, t-Sox17に対する抗体を用いた各Sox17 mRNA isoformの産物の同定とその細胞内局在の差異 Sox17とt-Sox17 mRNA isoformの産物を検討するため、Sox17蛋白のN端、HMG box、C端領域に対する3種類のペプチド抗体、抗recombinant Sox17抗体 (兎ポリクロ)を各々作成し、western blot解析、免疫組織化学的解析を行った。その結果、Sox17およびt-Sox17 mRNA isoformとも推定されるORFに従って翻訳されることが明かとなった。また、免疫組織化学的解析の結果、t-Sox17も、Sox17同様、核に存在することが明らかとなり、両isoformとも、遺伝子の発現調節に関与している可能性が推測された。Sox, t-Sox17のDNA結合能、転写活性化能の解析減数分裂前後におけるSox17からt-Sox17 formへの変換における機能的意義を明らかにすることを目的とし、両isoformのGST融合蛋白を作成し、SELEX法, EMSA法によりDNA結合能について検討した。その結果、Sox17において、SRYや他のSox蛋白同様、AACAAT配列に高い親和性を示した。一方、t-Sox17は、SELEX法による結合配列の濃縮が認められず、少なくとも配列特異的DNA結合能が欠損していることが確認された。また、4コピーのSox17結合配列をSV40 promoter-luciferase遺伝子の上流に挿入し、pCDM8/Sox17, pCDM8/t-Sox17やそのdelition-mutant constructsとともに、L929またはHela cellsに導入し、転写活性化能を検討した。その結果、Sox17蛋白は、その結合配列を介してluciferaseの発現を誘導することが明らかとなり、C末のSerに富む領域が転写活性化に必須のドメインであることが明らかとなった。以上の結果から、Sox17は、精細胞の初期において転写因子として下流遺伝子の発現を調節することにより機能し、減数分裂後、alternative splicingにより転写活性化領域を有するがDNA結合能を欠いたt-Sox17 formへ変換され、Sox17と異なった役割を担っていることが推測される。

Sox17, t-Sox17 immunoglobulin antibody, anti-recombinant Sox17 antibody, immunocytochemistry, immunocytochemistry and immunocytochemistry. The results show that Sox17 is presumed to have an ORF error and an error error. The results indicate that the error is not valid. The results of immuno-histochemical analysis, t-Sox17, Sox17 homology, the presence of DNA fragments in the nuclei, the expression of isoform genes, and the possibility of immunocytochemistry were found to be positive. Analysis of the meaning of Sox, t-Sox17 DNA binding energy and writing activation energy before and after meiosis. The meaning of the mechanism before and after mitosis is clear. The purpose of the fusion protein, isoform, GST fusion protein, SELEX method, EMSA method, DNA binding energy and DNA binding energy are analyzed. The results of Sox17, SRY, Sox protein homology, AACAAT alignment and sex index were analyzed. The combination of one party, t-Sox17 method and SELEX method combined with the combination of information information and special information can not be verified by the combination of DNA and DNA. The combination of 4-year-old and 4-year-old Sox17 is combined with the columns of SV40 promoter-luciferase data input, pCDM8/Sox17, pCDM8/t-Sox17 data delition-mutant constructs input, L929 Hela cells input, and write activation energy. The results, Sox17 protein, and combination of the results, the Sox17 protein, and the combination of the results, the Sox17 protein, and the combination of the results, the results, the As a result of the above results, the results of the above results are as follows: the results of the above results, Sox17, fine cell early stage, low-level cell writing factors, low-level write-off factors, post-mitotic, post-mitotic,