Development and application of novel transgenic technology by in vivo RMCE

体内RMCE新型转基因技术的开发与应用

• 批准号: 20700368
• 负责人: OHTSUKA Masato
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20700368/
• 关键词: Cre-loxPシステム; RMCE法; トランスジェニックマウス; 蛍光遺伝子; 顕微注入法; Rosa26遺伝子座位; ノックダウン; Cre-loxpシステム; 疾患感受性遺伝子

This study established a targeted transgenesis system based on Cre-loxP site-specific recombination in fertilized eggs, but not in ES cells. A transgene, flanked by two mutant loxP sites, was integrated into target loci in the seed mice (containing loxP-site derivatives at Rosa26 locus) by recombinase-mediated cassette exchange (RMCE) in fertilized eggs. By applying this method, we have established a total of 25 transgenic lines showing ubiquitous, strong, and reproducible transgene expression. We also demonstrated that knockdown mice can be readily generated by PITT by taking advantage of our reproducible and highly efficient expression system.

本研究建立了一个基于Cre-loxP位点特异性重组的受精卵靶向转基因系统，而不是ES细胞。通过重组酶介导的盒交换（RMCE）在受精卵中将两侧具有两个突变loxP位点的转基因整合到种子小鼠（在Rosa 26位点含有loxP位点衍生物）的靶位点中。通过应用这种方法，我们已经建立了共25个转基因株系，显示普遍存在的，强大的，和可重复的转基因表达。我们还证明，敲低小鼠可以很容易地产生PITT利用我们的可重复性和高效的表达系统。

项目成果

Targeted transgenesis through pronuclear injection of improved vectors into in vitro fertilized eggs

通过将改良载体原核注射到体外受精卵中进行靶向转基因

• DOI: 10.1007/s11248-011-9505-y
• 发表时间: 2011
• 期刊: Transgenic Research
• 影响因子: 3
• 作者: Ohtsuka;M.;Miura;H.;Nakaoka;H.;Kimura;M.;Sato;M.;Inoko;H.
• 通讯作者: H.

人工miRNA発現コンストラクトの作製、検証とノックダウンマウス作製

人工 miRNA 表达构建体的制备和验证以及敲除小鼠的产生

• 发表时间: 2009
• 作者: 三浦浩美;猪子英俊;木村穣;大塚正人
• 通讯作者: 大塚正人

Pronuclear injection-based targeted transgenesis for in vivo RNAi in the mouse

基于原核注射的小鼠体内 RNAi 靶向转基因

• 发表时间: 2010
• 作者: 三浦浩美;木村穣;猪子英俊;大塚正人
• 通讯作者: 大塚正人

Major histocompatibility complex (Mhc) class Ib gene duplications, organization and expression patterns in mouse strain C57BL/6.

• DOI: 10.1186/1471-2164-9-178
• 发表时间: 2008-04-17
• 期刊: BMC GENOMICS
• 影响因子: 4.4
• 作者: Ohtsuka, Masato;Inoko, Hidetoshi;Kulski, Jerzy K.;Yoshimura, Shinichi
• 通讯作者: Yoshimura, Shinichi

Pronuclear injection-based mouse targeted transgenesis for reproducible and highly efficient transgene expression

• DOI: 10.1093/nar/gkq860
• 发表时间: 2010-12-01
• 期刊: NUCLEIC ACIDS RESEARCH
• 影响因子: 14.9
• 作者: Ohtsuka, Masato;Ogiwara, Sanae;Inoko, Hidetoshi
• 通讯作者: Inoko, Hidetoshi