癌遺伝子の発現抑制による唾液腺癌の分子標的治療法の確立

ヒト唾液腺癌細胞株ACC2、ACCEにgreen fluorescent protein(GFP)遺伝子を導入したGFP-ACC2、GFP-ACCM細胞を用いてsiAkt1,2,3を用いたAktアイソフォームの単一および複数の発現抑制こよる唾液腺癌細胞のin vitroおよびin vivoにおける増殖抑制效果について評価した。唾液腺癌細胞に10nMの濃度でsiAkt1,2,3を単一あるいは混合して導入し、そのRNAi効果および増殖こ与える影響を評価した。RNAi効果についてはWestem blot法にて確認した。in vitro増殖抑制効果については、GFPの蛍光強度と細胞数の実数測定にて行った。コントロールsiRNAとしてはGFPに対する合成siRNAを用いた。合成siRNAのin vivoデリバリーシステムにはアテロコラーゲンを用いた全身投与法を用いた。唾液腺癌細胞をヌードマウス背部皮下に移植し、腫瘍形成後に合成siRNAとアテロコラーゲンとの混台物を4日間の投与間隔で静脈内投与し、腫瘍体積の経時的変化にて評価した。siAt1,2,3それぞれのノックダウンによるヒト唾液腺癌細胞に対するin vivo抗腫瘍活性を確認した。ダブルノックダウンによるin vitroおよびin vivo抗腫瘍活性の相乗効果についてはあまり認められなかった。さらに既存の治瞭法すなわち放射線や抗癌薬との併用効果について検討したところ、siAkt1,2,3と放射線あるいは抗癌薬(シスプラチン)との併用による相乗効果が確認された。現在、上述の細胞および組織よりtotal RNAを抽出し、マイクロアレイ解析を行い、オフターゲット効果の有無アイソフォーム共通あるいは特異的な遺伝子発現制御、バイオマーカー候補の同定について行っている。

ヒト唾液腺癌細胞株ACC2、ACCEにgreen fluorescent protein(GFP)遺伝子を導入したGFP-ACC2、GFP-ACCM細胞を用いてsiAkt1,2,3を用いたAktアイソフォームの単一および複数の発現抑制こよる唾液腺癌細胞のin vitroおよびin vivoにおける増殖抑制效果について評価した。唾液腺癌細胞に10nMの濃度でsiAkt1,2,3を単一あるいは混合して導入し、そのRNAi効果および増殖こ与える影響を評価した。RNAi効果についてはWestem blot法にて確認した。in vitro増殖抑制効果については、GFPの蛍光強度と細胞数の実数測定にて行った。コントロールsiRNAとしてはGFPに対する合成siRNAを用いた。合成siRNAのin vivoデリバリーシステムにはアテロコラーゲンを用いた全身投与法を用いた。唾液腺癌細胞をヌードマウス背部皮下に移植し、腫瘍形成後に合成siRNAとアテロコラーゲンとの混台物を4日間の投与間隔で静脈内投与し、腫瘍体積の経時的変化にて評価した。siAt1,2,3それぞれのノックダウンによるヒト唾液腺癌細胞に対するin vivo抗腫瘍活性を確認した。ダブルノックダウンによるin vitroおよびin vivo抗腫瘍活性の相乗効果についてはあまり認められなかった。さらに既存の治瞭法すなわち放射線や抗癌薬との併用効果について検討したところ、siAkt1,2,3と放射線あるいは抗癌薬(シスプラチン)との併用による相乗効果が確認された。現在、上述の細胞および組織よりtotal RNAを抽出し、マイクロアレイ解析を行い、オフターゲット効果の有無アイソフォーム共通あるいは特異的な遺伝子発現制御、バイオマーカー候補の同定について行っている。