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ピロリ菌のVacA毒素の毒性発現における受容体RPTPalphaの機能解析

幽门螺杆菌VacA毒素毒性表达中受体RPTPα的功能分析

基本信息

批准号：
20890165
负责人：
久恒順三
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20890165/
关键词：
ヘリコバクター・ピロリ空胞化毒素 VacA 細菌毒素毒性発現毒素受容体 RPTPα

项目摘要

ピロリ菌が産生する空胞化毒素(VacA)の受容体であるRPTPαとの結合がVacAの毒性発現にどのように関連するかについて解析した。まず、U937とJurkat細胞において、VacAがRPTPαあるいは最近報告されたCD18と結合するか否かを免疫沈降法で解析した。その結果、VacAはRPTPαとは結合するが、CD18とは結合しなかった。また、RPTPαとCD18との結合も否定的であった。胃上皮細胞AZ-521ではCD18抗体と反応する蛋白は検出されなかった。そこで、VacAが結合するRPTPαと相互作用する分子を探索する為、AZ-521細胞にV5標識RPTPαを発現させ、V5抗体により免疫沈降させたが、明確に共沈する分子は検出されなかった。並行して、RPTPαをノックダウン(KO)させた細胞株を作製した。RPTPα-KO細胞株の作製は、レンチウイルスベクターを用いて安定発現させるRPTPα siRNAのplasmidを構築し、AZ-521細胞に導入し、Puromycinにより選択した。細胞にVacAを作用させると空胞活性を示すが、RPTPα-KO細胞ではVacAとの結合とVacAの細胞内への取込、空胞活性が抑制された。しかし、RPTPα-KO細胞でもVacAによるp38MAPK,Erk1/2,Aktのいずれの活性化も対照同様に認められ、p38MAPK経路を介して亢進されるCOX-2発現にも変化しなかった。不思議な事に、RPTPαを過剰発現させた綱胞では、VacAによるp38MAPK及びErk1/2の活性化が顕著に抑制された。RPTPαを過剰発現させたことで細胞膜上のraftの分子組成が大きく変化し、VacAの本来の効果に影響が生じたと考えられたが、このRPTPαの予想外の成績を理解するには、さらに発現したRPTPαの細胞内分布、動態などを知る必要がある。

Analysis of the association between RPTPα and VacA receptors produced by bacteria and the development of VacA toxicity U937, VacA, RPTPα, CD18, and immunoprecipitation assay were recently reported. The result is that VacA is RPTPα, CD18 is RPTPα, and CD18 is RPTP α.また、RPTPαとCD18との结合も否定的であった。AZ-521 cells in gastric epithelial cells are resistant to CD18 antibody and protein expression. V5-labeled RPTPα was detected in AZ-521 cells, and V5-labeled RPTPα was detected in V5-labeled cells, and V5-labeled RPTP α was detected in V5-labeled cells. In parallel, RPTPα was used to control the cell line. RPTPα-KO cell lines were constructed and purified using stable RPTPα siRNA plasmid, and introduced into AZ-521 cells. Cell VacA binding and intracellular VacA uptake were inhibited in RPTPα-KO cells. RPTPα-KO cells contain p38MAPK,Erk1/2,Akt, and COX-2. The activation of p38MAPK and Erk1/2 was inhibited by RPTPα. The molecular composition of RPTPα in cell membrane is greatly changed, and the effect of VacA on its production is studied. It is necessary to understand the intracellular distribution and dynamics of RPTPα.