口腔内グラム陽性菌由来のリポタンパク質が持つ免疫活性化作用の解明

口腔革兰氏阳性菌来源脂蛋白的免疫激活作用的阐明

基本信息

批准号：
20890221
负责人：
片岡嗣雄
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20890221/
关键词：
感染症微生物細菌歯学免疫学

项目摘要

【目的】歯周疾患は、プラークバイオフィルムの蓄積が原因とされ、その継続的な刺激による炎症反応が歯周炎という不可逆的な疾患の誘因となる。しかし、プラークバイオフィルムの主要構成細菌であるグラム陽性菌と歯周疾患誘発との関係は不明である。一方、宿主細胞の自然免疫系は、Toll-like receptor2(TLR2)によって細菌由来リポタンパク質(LP)を認識することが示されているが、LPの病因論的役割は不明な点が多い。そこで本研究では、口腔内グラム陽性菌に特有なLPが宿主細胞のTLR2を介して誘導する免疫活性化作用を解明することを目的とした。【方法】口腔内グラム陽性菌として、う蝕原性細菌であるStreptococcus mutans 109c、S. sobrinus NIDR6715を使用した。Triton X-114二相分離法によって菌体からLPを抽出した。菌体ならびに抽出LP刺激によるヒト単球系細胞THP-1からのIL-8産生量はELISAで評価し、TLR2遺伝子を導入したHEK293細胞におけるNF-κBの活性化はルシフェラーゼレポーター法で評価した。【結果・考察】S. sobrinusとS. mutansの菌体刺激の結果、いずれの菌株もIL-8産生を誘導し、NF-κBを活性化したが、それらはS. mutansよりもS. sobrinusで有意に高い値を示した。さらに、両菌株からの菌体抽出LP刺激もまた、上述の菌体刺激と同様な結果を示した。しかし、この菌体抽出LPの活性はリポプロテインリパーゼ処理により完全に阻害された。以上の結果から、う蝕原性細菌は菌体由来LPのTLR2による認識を介して炎症応答を誘導していること、そしてS. mutansよりもS. sobrinusの方が強い炎症誘導活性、免疫活性を持つことが示唆された。

目的：牙周疾病被认为是由斑块生物膜的积累引起的，而持续刺激引起的炎症反应会触发一种称为牙周炎的不可逆疾病。然而，革兰氏阳性细菌，牙菌膜的主要组成细菌与牙周疾病诱导之间的关系尚不清楚。另一方面，已证明宿主细胞的先天免疫系统通过Toll样受体2（TLR2）识别细菌脂蛋白（LPS），但LPS的致病作用尚不清楚。因此，这项研究旨在阐明通过TLR2在宿主细胞中诱导的口服革兰氏阳性细菌独有的LPS的免疫活化作用。方法：链球菌链球菌S. sobrinus nidr6715，一种致富的细菌，用作革兰氏阳性的口腔内腔。通过Triton X-114二相分离方法从细胞中提取LPS。通过ELISA评估了通过刺激细胞和提取的LP产生的IL-8量，并通过ELISA评估了NF-κB在用TLR2基因转染的HEK293细胞中的激活，通过荧光素酶报告基因研究来评估。 [结果和讨论]由于刺激了Sobrinus和S. utans，两种菌株都诱导IL-8产生和活化的NF-κB，但在Sobrinus链球菌中它们的含量明显高于S. mutans。此外，对两种菌株的细胞提取LP的刺激也显示出与上述细胞刺激相似的结果。但是，该细胞提取的LP的活性通过脂蛋白脂肪酶处理完全抑制。上述结果表明，致癌细菌通过TLR2识别细胞来源的LP会诱导炎症反应，而Sobrinus链球菌的炎症诱导和免疫活性比Mutans更强。