膵内分泌細胞における開口放出の制御機構
胰腺内分泌细胞胞吐作用的控制机制
基本信息
- 批准号:21590227
- 负责人:
- 金额:$ 3万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
- 财政年份:2009
- 资助国家:日本
- 起止时间:2009 至 2011
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
生体の糖代謝に重要なホルモンにインスリンが挙げられる。インスリンの分泌にかかわる分子の機能や動態を明らかにするために、蛋白の蛍光標識と2光子励起画像法を応用して解析した。分泌細胞株であるINS-1に光活性型GFP(PA-GFP)標識SNAP25の遺伝子を導入し、細胞膜の一部で光活性化を行った結果、SNAP25の拡散が観察された。さらに拡散の様式には二種類有ることを見出した。本実験をより生理的な初代培養細胞で行うために、発現ウィルスベクターの作製に取り組み、成功した。また、SNAP25の拡散はSyntaxinの密度勾配に左右される可能性を考え、蛍光標識ベクターの作製を行った。さらにSyntaxinの拡散については光褪色後蛍光回復法を用いて検討した。膵ベータ細胞にはインスリン顆粒の他、シナプス小胞様顆粒も存在する。SNAP25の分子内FRETプローブ(SLIM)を利用しても、シナプス小胞様顆粒の開口放出に伴うシグナルは現在まで検出できていない。以前行った解析によると、シナプス小胞様顆粒のケイジドカルシウム刺激による分泌は同期し、かつ、その数はインスリン顆粒よりも多いため(Hatakeyama H.et al.J Physiol. 582, 1087, 2007)、SNAP25以外のSNARE蛋白質が、膵β細胞のシナプス小胞様顆粒の膜融合を担っている可能性がある。SNAP25の類似体であるSNAP23は組織免疫染色により、膵ベータ細胞に発現していることが確認されており、本分子の関与が示唆される。そこで、SNAP23に二種類のGFP変異体蛍光分子を融合させたFRETプローブを構築した。INS-1細胞に導入し、分泌刺激に伴う変化を解析した。また、SNAREの複合化に深くかかわるMunc18の変異体蛋白を膵島に過剰発現させ、分泌量の変化を2光子励起顕微鏡で定量化した。
The metabolism of sugar in living organisms is very important. The molecular function and dynamics of protein secretion are analyzed by two-photon excitation imaging. The secretion of INS-1 in cell lines was characterized by photoactive GFP(PA-GFP), SNAP25 gene was introduced, and part of the cell membrane was photoactivated. SNAP25 gene was detected. There are two kinds of things that can be seen today. This is the first time that the physiological culture cells have been successfully established. SNAP25 can be used to determine the density of Syntaxin and the operation of Syntaxin. Syntaxin is used to detect light after light fading. The existence of other particles in the cell and other particles in the cell. SNAP25 intramolecular FRET membrane (SLIM) is used to release small cellular particles from the openings. Before the analysis of the protein, the secretion of small cell particles was stimulated by the same period, and the number of small cell particles was increased (Hatakeyama H.et al.J Physiol.582, 1087, 2007). SNARE proteins other than SNAP25 were also analyzed. SNAP25 analogs were identified by tissue immunostaining, and SNAP23 was associated with the expression of SNAP 25. SNAP23 is a fusion of two kinds of GFP allogeneic molecules. INS-1 cells are introduced and secreted, and their chemical reactions are analyzed. SNARE complexation was quantified by 2-photon excitation microscopy, and Munc18 protein was detected and secreted.
项目成果
期刊论文数量(0)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
インスリン顆粒の開口分泌様式
胰岛素颗粒的外分泌模式
- DOI:
- 发表时间:2010
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Garcia M.L.;Rao M.V.;Fujimoto J.,Garcia V.B.;Shah S.B.;Crum J.;Gotow T.,Uchiyama Y.;Ellisman M.;Calcutt N.A.;Cleveland D.W.;Tsutomu Tanabe(代表);高橋倫子;浦野哲盟;高橋倫子
- 通讯作者:高橋倫子
Protein dynamics during insulin exocytosis analyzed with two-photon imaging
用双光子成像分析胰岛素胞吐过程中的蛋白质动力学
- DOI:
- 发表时间:2009
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:高橋倫子;畠山裕康;大野光代;河西春郎
- 通讯作者:河西春郎
インスリン分泌におけるSNARE複合化
胰岛素分泌中的 SNARE 络合
- DOI:
- 发表时间:2010
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Garcia M.L.;Rao M.V.;Fujimoto J.,Garcia V.B.;Shah S.B.;Crum J.;Gotow T.,Uchiyama Y.;Ellisman M.;Calcutt N.A.;Cleveland D.W.;Tsutomu Tanabe(代表);高橋倫子
- 通讯作者:高橋倫子
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- 影响因子:0
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- 发表时间:
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- 作者:
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