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PEG化リン脂質ミセルによる糖鎖電気泳動分析の高性能化

使用聚乙二醇化磷脂胶束提高聚糖电泳分析的性能

基本信息

批准号：
09J00160
负责人：
川井隆之
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

large-volume sample stacking with electroosmotic flow pump (LVSEP)法を用いる高感度電気泳動分析法をアニオン性,カチオン性の両試料に適用し,動電クロマトグラフィー(EKC)などの様々な分離モードで分析することに成功し,採用第2年度までに最大で1000倍程度の高感度化に成功した。第3年度では,さらなる高感度化を目標とし,field-amplified sample injection (FASI)法とLVSEP法との結合について検討を行った。LVSEP-FASI法の濃縮性能を検討するため,モデル試料としてfluoresceinを用いてキャピラリー電気泳動(CE)をベースにLVSEP-FASI分析を行った。バイアルの交換時間および印加圧力の最適化の結果,それぞれ10 min,1.0 psiとした際従来のCE分析と比較して70,000倍の高感度化が達成された。向様にAPTS誘導体化G7のWSEP-FASI-CE分析を行った結果,0.5 psiの圧力印加および15 minにおけるバイアルの交換により,CEと比較して10,000倍の高感度化および未反応のAPTSとG7のベースライン分離が達成された。検出時間,ピーク高さのRSDはそれぞれ2.4%,11%であり,オンライン試料濃縮を長時間行う分析法としては良好な再現性が得られた。また,分離性能の最適化の結果,LVSEP同様にLVSEP-FASI法を用いてもほとんど分離度が損なわれないことが判明した。同様にマイクロチップ電気泳動(MCE)においてもLVSEP-FASIの検討を行った。モデル試料としてfluoresceinを用い,試料濃縮時間を240sとしてLVSEP-FASI-MCE分析を行ったところ,わずか10pMの試料の検出に成功した。従来法であるpinched injectionを用いたMCE分析の結果と比較したところ,6万倍の高感度化が達成された。以上のように,CE,MCEのどちらにおいてもLVSEP-FASI法の高い濃縮性能分離性能が確認された。

The large-volume sample stacking with electroosmotic flow pump (LVSEP) method was used to analyze the sensitivity of the samples by high sensitivity electrophoresis. the samples were analyzed by high sensitivity electrophoresis. the results of the large-volume sample stacking with electroosmotic flow pump (LVSEP) method were analyzed by high sensitivity electrophoresis, high sensitivity electrophoretic analysis (EKC), high sensitivity analysis, high sensitivity, high sensitivity and high sensitivity, respectively. In the third year, there is a high degree of sensitivity, and the field-amplified sample injection (FASI) method is combined with the LVSEP method. The LVSEP-FASI method was used to analyze the performance of the fluorescein, and the CE was used to analyze the performance of the LVSEP-FASI. In order to verify the results of the Indian force optimization test during the transit time, the CE analysis was 70000 times more sensitive than that of the CE analysis through 10 min,1.0 psi tests. The results of G7 WSEP-FASI-CE analysis showed that CE was 10000 times higher than that of APTS, which was 10000 times higher than that of APTS. During the time out, 2.4% of the data were collected and 11% of the data were collected, and the data were analyzed for a long time. The RSD was good and the property was good. The results of the most optimized results of the isolation performance, LVSEP and LVSEP-FASI method are used to determine the accuracy of the separation performance. This is the same as the MCE (Electronic Swimming Program), which is the same as the LVSEP-FASI. In the first half of the year, the fluorescein was used, the LVSEP-FASI-MCE analysis was completed at 240 s, and the 10pM was successfully read. The results of pinched injection were compared with the results of MCE analysis, and the results of 60, 000 times of high sensitivity were higher than those of normal control. Above, CE,MCE