バラ科サクラ属に特異な自家不和合性認識機構の解明

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バラ科サクラ属果樹の示す配偶体型自家不和合性においては、花柱側因子は細胞毒であるS-RNaseであり、花粉側因子はタンパク質分解に関与する分子種であるF-boxタンパク質(SFB)であることが遺伝的研究により明らかとなっている。本研究は両因子のタンパク質レベルでの機能調査を通じて、バラ科サクラ属における自己非自己認識機構を明らかにすることを目的としている。1.SCF^<SFB>の調査:F-boxタンパク質が標的タンパク質を分解誘導するためには、Skp1を介しCullin1とSCF複合体を形成する必要がある。免疫沈降に利用可能な各種組換えタンパク質の作出し、共免疫沈降実験によってSFB-Skp1間、Skp1-Cullin1間の相互作用を確認することができた。2。SFB標的タンパク質候補の探索:SFB標的タンパク質はSFB、S-RNaseの2因子に基づく自己・非自己認識の結果として、和合または不和合依存的に分解されるものであると予想される。よって組換えSFB、S-RNaseおよび花粉タンパク質を用いたPull downアッセイによるスクリーニングを試みた。様々な実験条件を試したが、現在のところSFB標的タンパク質の単離には成功していない。3.S-RNase結合花粉タンパク質の探索:前年度に、Yeast 2 HybridスクリーニングによりS-RNase結合花粉タンパク質としてActinを単離した。ActinはS-RNaseの毒性ターゲットである可能性が考えられたため、ActinとS-RNaseの結合様式を詳細に調査した。Actinは塩濃度に応じて単量体、多量体をとることが知られているが、S-RNaseは単量体アクチン、重合体アクチンのいずれとも結合することが明らかとなった。