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サクラ属自家不和合性における新規の花粉側共通因子候補DNaJ-likeの機能解明

DNAaJ-like的功能阐明，一种新的花粉侧共同因子候选物，导致李属自交不亲和性

基本信息

批准号：
20K06031
负责人：
松本大生
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Fukui Prefectural University (2021-2022)Yamagata University (2020)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K06031/
关键词：
DnaJ アンチセンスオリゴ S-RNase サクラ属自家不和合性カンカオウトウ

项目摘要

本研究課題では、サクラ属のS-RNase依存性自家不和合性における共通因子候補として単離したDNaJ様タンパク質SDJ（仮称）の機能解析を目的としている。3年目にあたる令和４年度は以下の調査を行った。A. SDJの花粉内相互作用タンパク質の探索：抗SDJ抗体を固相化したビーズを用いて花粉タンパク質の共免疫沈降ならびにLC-MS/MSを行ったところ，SDJと結合するタンパク質候補としてSLFL6が形成するSCF複合体およびリボソーム関連タンパク質を同定できた。B.SDJの細胞内局在調査：GFPをC末端に融合した組換えSDJ-GFPタンパク質をアグロインフィルトレーション法によってベンサミアーナタバコ葉で一過的に発現させ、共焦点レーザー顕微鏡で観察したところ、SDJは細胞質に局在するタンパク質であることが示唆された。C. SDJの不和合反応への関与の検証：‘佐藤錦’（S3S6）花粉の液体発芽培地における花粉管伸長は組換えS３-およびS6-RNase混合物の添加によって特異的に抑制された．SDJアンチセンスオリゴを単独で液体発芽培地に添加した際は花粉管伸長に影響はみられなかったが、組換えS-RNase混合物とSDJアンチセンスオリゴを同時に添加したところ、組換えS-RNase混合物による花粉管伸長の抑制は有意に緩和された．このことから、SDJは不和合反応に関与している可能性が示唆された。

The purpose of this study is to analyze the function of S-RNase dependency, self-incompatibility and self-compatibility of SDJ. 3 years old and 4 years old A. SDJ pollen interaction: anti-SDJ antibody solid-phase, anti-SDJ antibody B. Investigation of SDJ's intracellular structure: GFP C-terminal fusion, SDJ-GFP protein fusion, SDJ C. SDJ's Incompatibility and Reversal: The pollen tube elongation of 'Sato Nishiki'(S3S6) was inhibited by the addition of S3-S6-RNase mixture in liquid bud culture. The pollen tube elongation of 'Sato Nishiki'(S3S6) was inhibited by the addition of S3-S6-RNase mixture in liquid bud culture. The inhibition of pollen tube elongation by S-RNase mixtures was intentionally mitigated. The possibility of a conflict between SDJ and the United States is shown.