サクラ属自家不和合性における新規の花粉側共通因子候補DNaJ-likeの機能解明

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本研究課題では、サクラ属のS-RNase依存性自家不和合性における共通因子候補として単離したDNaJ様タンパク質SDJ（仮称）の機能解析を目的としている。3年目にあたる令和４年度は以下の調査を行った。A. SDJの花粉内相互作用タンパク質の探索： 抗SDJ抗体を固相化したビーズを用いて花粉タンパク質の共免疫沈降ならびにLC-MS/MSを行ったところ，SDJと結合するタンパク質候補としてSLFL6が形成するSCF複合体およびリボソーム関連タンパク質を同定できた。B.SDJの細胞内局在調査：GFPをC末端に融合した組換えSDJ-GFPタンパク質をアグロインフィルトレーション法によってベンサミアーナタバコ葉で一過的に発現させ、共焦点レーザー顕微鏡で観察したところ、SDJは細胞質に局在するタンパク質であることが示唆された。C. SDJの不和合反応への関与の検証：‘佐藤錦’（S3S6）花粉の液体発芽培地における花粉管伸長は組換えS３-およびS6-RNase混合物の添加によって特異的に抑制された．SDJアンチセンスオリゴを単独で液体発芽培地に添加した際は花粉管伸長に影響はみられなかったが、組換えS-RNase混合物とSDJアンチセンスオリゴを同時に添加したところ、組換えS-RNase混合物による花粉管伸長の抑制は有意に緩和された．このことから、SDJは不和合反応に関与している可能性が示唆された。