ビタミンD及びリトコール酸の受容体であるビタミンD受容体のリガンド選択的作用機構

维生素D受体的配体选择性作用机制，维生素D受体是维生素D和石胆酸的受体

• 批准号: 09J03828
• 负责人: 石澤 通康
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J03828/
• 关键词: ビタミンD; リトコール酸; 胆汁酸; ビタミンD受容体; ビタミンD受容体欠損マウス; 大腸癌; 核内受容体; カルシウムチャネル; 大腸がん

リガンド依存性転写因子ビタミンD受容体(VDR)のリガンド選択的作用機構解明を目的とし、細胞及び動物での研究を進めた。1、細胞レベルでの研究:先行研究では腸管由来細胞株において、VDR標的遺伝子transient receptor potential vanilloid 6(TRPV6)の転写誘導パターンが活性型ビタミンD_3と胆汁酸lithocholic acid(LCA)誘導体において異なることを見出した。昨年度までに、p38阻害剤はTRPV6遺伝子選択的に転写誘導を阻害すること、リガンド依存性のTRPV6プロモーター活性に対してp38阻害剤の効果が軽微であること、タンパク質合成阻害剤シクロヘキシミド処理によってTRPv6転写が顕著に抑制されることを明らかにした。本年度は、p38αのsiRNA導入実験を検討した。活性型ビタミンD_3依存性のTRPV6転写は、p38α siRNAによって抑制された。一方、代表的なVDR標的遺伝子Cytochrome P450 24a1(CYP24A1)は抑制されなかった。さらにTRPV6転写誘導に必要な新規合成タンパク質候補として、growth arrest and DNA damage-inducible gene 45A(GADD45A)を同定した。GADD45Aは活性型ビタミンD_3処理1時間から3時間の間に発現誘導した。GADD45A siRNAの導入は、活性型ビタミンD_3によるTRPV6転写誘導を抑制した。CYP24A1転写誘導はGSAD45A siRNAに影響を受けなかった。以上の結果より、活性型ビタミンD_3によるTRPV6選択的な転写誘導メカニズムにp38とGADD45Aが関与することを明らかにした。2、動物での研究:先行研究では、マウスにおいて1αヒドロキシビタミンD_3と同程度に、LCA誘導体はCyp24a1を誘導したが、Trpv6の転写誘導と血中カルシウム濃度上昇は見られなかった。昨年度は、マウスCyp24a1のVDR標的臓器における転写誘導を評価し、活性型ビタミンD_3の効果が十二指腸及び空腸で強く、LCAの効果は回腸で最も強いことを示した。さらにVdrヘテロ及びホモ欠損マウスを用い、回腸での網羅的遺伝子解析を行い、LCA選択的なVDR標的遺伝子の候補遺伝子について、野生型マウスとVdr欠損マウスに活性型ビタミンD_3又はLCAを投与し、リガンド依存性発現変化と、VDR依存性発現変化を評価した。本年度は、腸管部位別の胆汁酸トランスポーター、胆汁酸結合タンパク質発現レベル、リガンド依存性発現変化を比較し、LCAの腸管部位選択的なCyp24a1転写誘導メカニズムを解析した。LCAがCyp24a1を効果的に転写誘導する回腸では、他の腸管部位に比べて胆汁酸トランスポーター、胆汁酸結合タンパク質の発現が顕著に高く、LCAを組織内に多く取り込みやすいことが示唆された。以上の結果は胆汁酸代謝関連の病態機構解明に有用である。

进行了细胞和动物研究，目的是阐明配体依赖性转录因子维生素D受体（VDR）的配体选择性作用机理。 1。细胞水平的研究：先前的研究发现，VDR靶基因，瞬态受体电势6（TRPV6）的转录诱导模式在活性维生素D_3和胆汁酸石酸（LCA）衍生物中的肠细胞系中有所不同。截至去年，据表明，p38抑制剂选择性抑制TRPV6基因的转录诱导，p38抑制剂对配体依赖性TRPV6启动子活性的影响很小，并且治疗蛋白质合成抑制剂抑制剂抑制剂抑制剂抑制剂抑制剂可显着抑制TRPV6 TRPV6转录。今年，我们讨论了用p38α引入siRNA的实验。活性维生素D_3依赖性TRPV6转录被p38αsiRNA抑制。另一方面，没有抑制代表性的VDR靶基因细胞色素P450 24a1（CYP24A1）。此外，生长停滞和DNA损伤诱导基因45a（GADD45A）被确定为TRPV6转录诱导所需的新型合成蛋白候选者。诱导GADD45A显示活性维生素D_3的1至3小时治疗。引入GADD45A siRNA抑制了活性维生素D_3诱导TRPV6转录的诱导。 CYP24A1转录诱导不受GSAD45A siRNA的影响。这些结果表明，P38和GADD45A参与了活性维生素D_3选择性转录诱导的机理。 2。动物研究：在先前的研究中，LCA衍生物在小鼠中与1α羟基维生素D_3诱导CYP24A1，但未观察到TRPV6的转录诱导和增加的血液钙浓度。去年，我们评估了VDR靶向器官中小鼠CYP24A1中的转录诱导，这表明活性维生素D_3在十二指肠和空肠中的作用很强，而LCA的效果在卵巢中最强。此外，使用VDR异质和同性恋不足的小鼠在肠胃中进行了全面的遗传分析，并用活跃的维生素D_3或VDR缺乏小鼠对活性维生素D_3或LCA进行了活性维生素D_3或LCA，以用于LCA选择性VDR vdr Torness Christent Christent Christent and Ligant和Ligand的convertent and Drigant neprent neprent neptrent neprent neptrent and Drigant neprent and依赖性依赖性依赖性依赖性。今年，我们比较了胆汁酸转运蛋白，胆汁酸结合蛋白表达水平以及肠部位的配体依赖性表达变化，并分析了LCA中肠道位点选择性CYP24A1转录诱导的机制。在回肠中，LCA有效地诱导CYP24A1，胆汁酸转运蛋白和胆汁酸结合蛋白的表达显着高于其他肠部位，这表明LCAS更可能被掺入组织中。以上结果可用于阐明与胆汁酸代谢相关的病理机制。

项目成果

リトコール酸誘導体は高カルシウム血症を伴わない作用選択的ビタミンD受容体アゴニストである

石胆酸衍生物是选择性维生素 D 受体激动剂，不会引起高钙血症

• 发表时间: 2010
• 期刊: ビタミン 84巻3号
• 作者: Satoko Ichiki;Yoko Kato-Unoki;Tomonori Somamoto;Miki Nakao;石澤通康
• 通讯作者: 石澤通康

リガンド選択的なビタミンD受容体作用発現機構の解析

配体选择性维生素D受体作用表达机制分析

• 发表时间: 2010
• 作者: 一木智子;鵜木(加藤)陽子;杣本智軌;中尾実樹;石澤通康
• 通讯作者: 石澤通康

p38MAPキナーゼ経路はビタミンD受容体標的遺伝子TRPV6の転写誘導に関与する

p38MAP 激酶通路参与维生素 D 受体靶基因 TRPV6 的转录诱导

• 发表时间: 2011
• 作者: Satoko Ichiki;Yoko Kato-Unoki;Tomonori Somamoto;Miki Nakao;石澤通康;一木智子;石澤通康
• 通讯作者: 石澤通康