ビタミンD及びリトコール酸の受容体であるビタミンD受容体のリガンド選択的作用機構

维生素D受体的配体选择性作用机制，维生素D受体是维生素D和石胆酸的受体

• 批准号: 09J03828
• 负责人: 石澤 通康
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J03828/
• 关键词: ビタミンD; リトコール酸; 胆汁酸; ビタミンD受容体; ビタミンD受容体欠損マウス; 大腸癌; 核内受容体; カルシウムチャネル; 大腸がん

リガンド依存性転写因子ビタミンD受容体(VDR)のリガンド選択的作用機構解明を目的とし、細胞及び動物での研究を進めた。1、細胞レベルでの研究:先行研究では腸管由来細胞株において、VDR標的遺伝子transient receptor potential vanilloid 6(TRPV6)の転写誘導パターンが活性型ビタミンD_3と胆汁酸lithocholic acid(LCA)誘導体において異なることを見出した。昨年度までに、p38阻害剤はTRPV6遺伝子選択的に転写誘導を阻害すること、リガンド依存性のTRPV6プロモーター活性に対してp38阻害剤の効果が軽微であること、タンパク質合成阻害剤シクロヘキシミド処理によってTRPv6転写が顕著に抑制されることを明らかにした。本年度は、p38αのsiRNA導入実験を検討した。活性型ビタミンD_3依存性のTRPV6転写は、p38α siRNAによって抑制された。一方、代表的なVDR標的遺伝子Cytochrome P450 24a1(CYP24A1)は抑制されなかった。さらにTRPV6転写誘導に必要な新規合成タンパク質候補として、growth arrest and DNA damage-inducible gene 45A(GADD45A)を同定した。GADD45Aは活性型ビタミンD_3処理1時間から3時間の間に発現誘導した。GADD45A siRNAの導入は、活性型ビタミンD_3によるTRPV6転写誘導を抑制した。CYP24A1転写誘導はGSAD45A siRNAに影響を受けなかった。以上の結果より、活性型ビタミンD_3によるTRPV6選択的な転写誘導メカニズムにp38とGADD45Aが関与することを明らかにした。2、動物での研究:先行研究では、マウスにおいて1αヒドロキシビタミンD_3と同程度に、LCA誘導体はCyp24a1を誘導したが、Trpv6の転写誘導と血中カルシウム濃度上昇は見られなかった。昨年度は、マウスCyp24a1のVDR標的臓器における転写誘導を評価し、活性型ビタミンD_3の効果が十二指腸及び空腸で強く、LCAの効果は回腸で最も強いことを示した。さらにVdrヘテロ及びホモ欠損マウスを用い、回腸での網羅的遺伝子解析を行い、LCA選択的なVDR標的遺伝子の候補遺伝子について、野生型マウスとVdr欠損マウスに活性型ビタミンD_3又はLCAを投与し、リガンド依存性発現変化と、VDR依存性発現変化を評価した。本年度は、腸管部位別の胆汁酸トランスポーター、胆汁酸結合タンパク質発現レベル、リガンド依存性発現変化を比較し、LCAの腸管部位選択的なCyp24a1転写誘導メカニズムを解析した。LCAがCyp24a1を効果的に転写誘導する回腸では、他の腸管部位に比べて胆汁酸トランスポーター、胆汁酸結合タンパク質の発現が顕著に高く、LCAを組織内に多く取り込みやすいことが示唆された。以上の結果は胆汁酸代謝関連の病態機構解明に有用である。

Research on the mechanism of VDR and VDR dependent factors in order to understand the purpose, cell and animal 1. Cell cycle research: In the first study, we studied the induction of VDR target gene transient receptor potential vanilloid 6(TRPV6) in the cell line derived from intestine, and the induction of bile acid litholic acid(LCA). In the past year, p38 inhibitors have been found to inhibit TRPV6 gene selection by inhibiting TRPV6 gene selection activity. The effects of p38 inhibitors on TRPV 6 gene selection activity have been investigated. This year, the introduction of p38α siRNA was investigated. Active D_3-dependent TRPV6-siRNA is an inhibitor of p38α. A representative of the VDR target gene Cytochrome P450 24a1 (CYP 24A1) is inhibited. TRPV6 is a novel gene inducer, growth arrest and DNA damage-inducible gene 45A (GADD 45A). GADD45A was discovered between 1 and 3 times for active video D_3 processing. GADD45A siRNA introduced into TRPV6 cells inhibited the induction of TRPV6 gene expression. CYP24A1 mRNA induction is affected by GSAD45A siRNA. The above results show that the active type D_3 and TRPV6 are selected from the group of p38 and GADD45A. 2. Animal studies: In the first study, LCA inducer was induced by Cyp24a1 and Trpv6, and the concentration of LCA in blood increased. In the past year, the effects of VDR, Cyp24a1 and LCA on duodenum and jejunum were evaluated. In addition, the VDR gene and VDR gene were analyzed in the study, the candidate gene of VDR gene selected by LCA was analyzed, the wild-type VDR gene and VDR gene were evaluated, and the LCA gene and VDR gene were evaluated. This year, we analyzed the Cyp24a1 induced changes in the gut sites of LCA by comparing the changes in bile acid concentrations and bile acid-binding properties of the gut sites. LCA Cyp24a1 results in the development of bile acid binding proteins in the intestine and in other intestinal regions. The above results are useful for understanding the pathological mechanisms associated with bile acid metabolism.

项目成果

リトコール酸誘導体は高カルシウム血症を伴わない作用選択的ビタミンD受容体アゴニストである

石胆酸衍生物是选择性维生素 D 受体激动剂，不会引起高钙血症

• 发表时间: 2010
• 期刊: ビタミン 84巻3号
• 作者: Satoko Ichiki;Yoko Kato-Unoki;Tomonori Somamoto;Miki Nakao;石澤通康
• 通讯作者: 石澤通康

リガンド選択的なビタミンD受容体作用発現機構の解析

配体选择性维生素D受体作用表达机制分析

• 发表时间: 2010
• 作者: 一木智子;鵜木(加藤)陽子;杣本智軌;中尾実樹;石澤通康
• 通讯作者: 石澤通康

p38MAPキナーゼ経路はビタミンD受容体標的遺伝子TRPV6の転写誘導に関与する

p38MAP 激酶通路参与维生素 D 受体靶基因 TRPV6 的转录诱导

• 发表时间: 2011
• 作者: Satoko Ichiki;Yoko Kato-Unoki;Tomonori Somamoto;Miki Nakao;石澤通康;一木智子;石澤通康
• 通讯作者: 石澤通康