多孔質担体集積基板を利用した単一細胞の網羅的な遺伝子発現解析法の開発

利用多孔载体集成基质开发单细胞综合基因表达分析方法

• 批准号: 09J08042
• 负责人: 細川 正人
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Tokyo University of Agriculture and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J08042/
• 关键词: 単一細胞; mRNA; 細胞マイクロアレイ

本研究では、動物細胞を対象とした非侵襲的なイメージング解析から侵襲的な遺伝子発現解析までを同時・多平行に行える網羅的細胞解析技術の確立を目指し、多孔質担体集積基板を利用した細胞の高密度集積技術、mRNA回収技術、及び遺伝子発現解析技術を開発・統合することを目的とした。昨年度までの研究から、基板上に網羅的に集積した細胞集団の中から、キャピラリーを用いて一細胞を回収し遺伝子発現を解析する手法を開発している。本研究期間ではこの手法を応用してイヌ血液等の臨床サンプルを用いた研究活動を実施し、血中腫瘍細胞の同定法の開発を試みた。この結果、イヌ腫瘍同定用の候補遺伝子を選別することができた。本手法とは別のアプローチとして、多孔質担体モノリスシリカを用いた細胞からのmRNA精製技術の開発も並行して進めた。これまでに、このモノリスシリカを集積化した基板を作製し、細胞からmRNAを抽出できることを実証している。本研究期間では、基板上に捉えた細胞のイメージング解析を行った後に、基板上で細胞を溶解し、モノリスシリカを介してmRNAを回収して遺伝子発現解析を行う技術までを確立した。また、本研究課題を進める中で、厳密に制御された微細貫通孔を介して細胞をフィルトレーションすることにより、細胞の大きさや変形能の違いに基づいて細胞集団を分離出来ることを発見した。このサイズ選択的な細胞回収法を応用して、全血から白血球や腫瘍細胞を特異的に分離回収できる可能性が示唆されている。これらの技術を組み合わせることにより、様々な細胞を含む血液などのサンプルから特定の細胞を選別し、イメージング解析により細胞表面の表現型を解析した後に、遺伝子発現解析によって個々の細胞の表現型をより詳細に評価する技術を確立することができると考えられる。

In this study, we use cell analysis technology to determine the target of cell analysis in multi-parallel network at the same time, porous carrier substrates make use of cell high-density collection technology, mRNA echo technology, and cell analysis technology to realize the purpose of cell analysis. In the last year's research, the data collection of the network on the substrate, the data collection, and the data collection were analyzed using a single cell response sub-system. During the period of this study, the blood samples were collected, the blood samples were collected, and the blood samples were tested by using the same method. The results show that you can use the same candidate child to select a different candidate. In this method, the porous carrier is used in different ways, and the cellular mRNA precision technology is used to improve the performance. Make sure that the substrate is used actively, and that the cell is mRNA to extract the substrate. During the period of this study, during the period of this study, after the analysis of the cell cycle on the substrate, the dissolution of the cell on the substrate, and the introduction of the mRNA on the substrate, the analytical technology was established. The project of this study is in the middle of the world, and the key system is to control the micro-hole, the cell, the cell. The selected cell return method was used to indicate the possibility of separation and return of blood cells, whole blood cells, white blood cells and cells. The combination of the technical and technical organization, the cell of the cell, the cell.

项目成果

全血からの循環腫瘍細胞高効率検出デバイスの開発

开发全血循环肿瘤细胞高效检测装置

• 发表时间: 2010
• 作者: 細川正人;早田大志;福田頼謙;新垣篤史;吉野知子;松永是
• 通讯作者: 松永是

DEVELOPMENT OF A METHOD FOR CYTOTOXIC CHEMICAL SCREENING USINGA SINGLE-CELL ARRAY INTEGRATED WITH A MICROFLUIDIC GRADIENT GENERATOR

使用与微流体梯度发生器集成的单细胞阵列开发细胞毒性化学筛选方法

• 发表时间: 2011
• 作者: Katsuhiko Matsumoto;Yuta Shinohara;Subhendu S.Bag;Yoshiki Takeuchi;Takashi Morii;Yoshio Saito;Isao Saito;Masahito Hosokawa
• 通讯作者: Masahito Hosokawa

循環腫瘍細胞の迅速検出に向けたマイクロデバイスの開発

开发用于快速检测循环肿瘤细胞的微型装置

• 发表时间: 2010
• 作者: 島宏美;飯島高志;中島宇史;岡村総一郎;細川正人
• 通讯作者: 細川正人

High-Density Microcavity Array for Cell Detection: Single-Cell Analysis of Hematopoietic Stem Cells in Peripheral Blood Mononuclear Cells

• DOI: 10.1021/ac900535h
• 发表时间: 2009-07-01
• 期刊: ANALYTICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 7.4
• 作者: Hosokawa, Masahito;Arakaki, Atsushi;Matsunaga, Tadashi
• 通讯作者: Matsunaga, Tadashi

TCR-β Repertoire Analysis of Antigen-Specific Single T Cells Using a High-Density Microcavity Array

• DOI: 10.1002/bit.22663
• 发表时间: 2010-06-01
• 期刊: BIOTECHNOLOGY AND BIOENGINEERING
• 影响因子: 3.8
• 作者: Arakaki, Atsushi;Ooya, Kaori;Matsunaga, Tadashi
• 通讯作者: Matsunaga, Tadashi