in vivo部位特異的光架橋法を用いたミトコンドリア膜透過装置の解析

使用体内位点特异性光交联方法分析线粒体膜渗透装置

• 批准号: 09J08047
• 负责人: 塩田 拓也
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J08047/
• 关键词: ミトコンドリア; 部位特異的光架橋法; シャペロン; 質量分析; 分子シャペロン

私は、in vivo部位特異的光架橋法を用いて、ミトコンドリア外膜膜透過装置のTOM40複合体のサブユニットで、受容体など多様な機能をもつ、Tom22の相互作用解析を行っている。in vivo部位特異的光架橋法とは、解析対象のタンパク質にBPAという光架橋側鎖をもつ非天然アミノ酸を部位特異的に導入し、UV照射により架橋を行う方法で、アミノ酸残基レベルの空間分解能で相互作用解析が行える手法である。Tom22について,サイトゾルドメインとTOM40複合体のもうひとつの受容体サブユニットTom20との相互作用,膜間部ドメインと内膜膜透過装置TIM23複合体の受容体サブユニットTim50との相互作用について,基質プレ配列または基質前駆体の存在下と非存在下,in vivoおよびin organelloで部位特異的光架橋を用いて解析し,Tom22の機能時の動的なタンパク質間相互作用変化を解明した。得られた結果は,in vivo部位特異的光架橋法が細胞内における膜タンパク質複合体の機能と関連した相互作用及びその変化を十分な空間分解能で明らかにできる強力な手法であることを示すものであり,PANS誌に論文発表した。さらに酵母細胞内で過剰発現したTom22がTOM40複合体に組み込まれる前に一過的に相互作用する因子として,サイトゾルのシャペロンに加えてミトコンドリア外膜タンパク質ポリン(Por1)を見出した。野生株、Por1破壊株、Por2破壊株におけるTom22の安定性をシクロヘキシミドチェイス実験により検討した。その結果、Por1破壊株ではTom22の安定性にわずかに影響が見られた。以上の結果から、Por1はTOM40複合体に含まれなかったTom22と一時的に相互作用し、分解から保護していることが示唆された

Private は, bridging in vivo site specific light を with い て, ミ ト コ ン ド リ ア outer membrane membrane through device の TOM40 complex の サ ブ ユ ニ ッ ト で, let body な ど many others な function を も つ, Tom22 の interaction line analytical を っ て い る. Bridging the in vivo site specific light と は, parse like の seaborne タ ン パ ク qualitative に BPA と い う light bridge side chain を も つ unnatural ア ミ ノ acid を site specific に import し, UV irradiation に よ り bridging を で う method, ア ミ ノ acid residues レ ベ ル の space decomposition can interact で parsing line が え る gimmick で あ る. Tom22 に つ い て, サ イ ト ゾ ル ド メ イ ン と TOM40 complex の も う ひ と つ の by let body サ ブ ユ ニ ッ ト Tom20 と の interaction between membrane department ド メ イ ン TIM23 complex の と lining membrane through the device by the capacity of body サ ブ ユ ニ ッ ト Tim50 と の interaction に つ い て, matrix プ レ match column ま た は matrix before 駆 の と non-existent, in the presence of the in vivo お よ び in organello で site specific light bridge を with い て parsing し, Tom22 の function の moving な タ ン パ ク qualitative interaction between variations change を interpret し た. To ら れ は た results, the in vivo bridging site specific light が intracellular に お け る membrane タ ン パ ク quality, and the function of complex の と masato even し た interaction and び そ の variations change を very な space decomposition can で Ming ら か に で き る powerful な gimmick で あ る こ と を shown す も の で あ り, PANS tzu に paper 発 table し た. さ ら に yeast cells で before turning 発 now し た Tom22 が TOM40 complex に group み 込 ま れ に a る before に interactions す る factor と し て, サ イ ト ゾ ル の シ ャ ペ ロ ン に plus え て ミ ト コ ン ド リ ア outer membrane タ ン パ ク qualitative ポ リ ン (Por1) を shows し た. Wild strains, Por1 壊 strains, Por2 breaking 壊 strains に お け る Tom22 の stability を シ ク ロ ヘ キ シ ミ ド チ ェ イ ス be 験 に よ り beg し 検 た. The results of そ そ, the impact of Por1 breaking 壊 strain で で Tom22 <s:1> on stability にわず に に が can be found in られた. の above results か ら, Por1 は TOM40 complex contains に ま れ な か っ た Tom22 と transient に し interaction, decomposition か ら protection し て い る こ と が in stopping さ れ た

项目成果

in vivo部位特異的光架橋法を用いた、ミトコンドリア外膜タンパク質Tom22の外膜挿入機構の解析

利用体内定点光交联方法分析线粒体外膜蛋白Tom22的外膜插入机制

• 发表时间: 2011
• 作者: Norihiko Kawai;Tomokazu Sato;Naokazu Yokoya;塩田拓也
• 通讯作者: 塩田拓也

in vivo部位特異的光架橋法によるミトコンドリア膜透過装置の解析

使用体内位点特异性光交联方法分析线粒体膜渗透装置

• 发表时间: 2011
• 作者: Katsuhiko Matsumoto;Yuta Shinohara;Kyoko Numajiri;Shinya Ishioroshi;Takashi Morii;Yoshio Saito;Isao Saito;塩田拓也
• 通讯作者: 塩田拓也

Analysis of the interaction mapping of Tom22, a component of the mit-ochondrial outer membrane translocator, by using in vivo site-specific photoctrosslinking

通过使用体内位点特异性光交联分析 Tom22（线粒体外膜易位蛋白的一个组成部分）的相互作用作图

• 发表时间: 2010
• 作者: Norihiko Kawai;Tomokazu Sato;Naokazu Yokoya;塩田拓也;齋藤義雄・高橋尚弥・松本桂彦・篠原雄太・竹内辰樹・齋藤烈;塩田拓也;松本桂彦・篠原雄太・竹内辰樹・齋藤義雄・齋藤烈・森井孝;塩田拓也;塩田拓也
• 通讯作者: 塩田拓也

in vivo部位特異的光架橋法を用いたミトントリア外膜膜透過装置の解析

利用体内位点特异性光交联法分析线粒体外膜膜渗透装置

• 发表时间: 2009
• 作者: Katsuhiko Matsumoto;Takashi Morii;塩田拓也;塩田拓也
• 通讯作者: 塩田拓也

In vivo protein-interaction mapping of a mitochondrial translocator protein Tom22 at work

• DOI: 10.1073/pnas.1105921108
• 发表时间: 2011-09-13
• 期刊: PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
• 影响因子: 11.1
• 作者: Shiota, Takuya;Mabuchi, Hide;Endo, Toshiya
• 通讯作者: Endo, Toshiya