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エピジェネティクスによるムチン抗原遺伝子発現機構の解明

利用表观遗传学阐明粘蛋白抗原基因表达机制

基本信息

批准号：
09J09447
负责人：
山田宗茂
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kagoshima University (2010)The Institute of Physical and Chemical Research (2009)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J09447/
关键词：
Mucin Epigenetics DNA methylation Hsstone modification MassARRAY ChIP assay Histone Modification MUC4 MUC5AC Mass ARRAY

项目摘要

今年度は、これまで明らかにしてきた膵胆管系腫瘍における「ムチン発現プロファイル」と「DNAメチル化状況」を複合的に評価することで、早期診断、さらには明確な治療戦略の提供を可能とする診断システムの構築を目標に掲げて研究を遂行してきた。同時に、さらに正確な診断の実現を可能とするために、膵胆管系腫瘍において異常高発現を示すと報告されているMUC3やMUC16,MUC17に関してのエピジェネティクス制御機構の解明を上記のテーマと平行して行った。・MUC3、MUC16、MUC17発現機構の解析:肺癌・乳癌・膵癌・大腸癌細胞株の中から、MUC3、MUC16、MUC17陽性・陰性細胞株を各々用いて、それぞれの細胞株に対する各ムチン遺伝子プロモーター全領域のシークエンシングを行い、その配列を元に質量分析によるDNAメチル化定量解析法を用いてDNAメチル化状態を検討した。さらにMUC3とMUC17において、ヒストン修飾状況と遺伝子発現の関係を調べるためにChIPを行った。今回の一連の発現解析において、1)MUC3は遺伝子転写開始付近におけるDNAメチル化により制御されていることが明らかとなった。2)MUC16は、5-AzadCやヒストン脱アセチル化阻害剤TSA処理により大幅に遺伝子量が回復するものの、直接的なエピジェネティクス制御機構の関与は認められなかった。3)MUC17に関しては、転写開始付近において、DNAメチル化だけでなく、ヒストンH3リジン9の化学修飾によっても制御されている可能性が明らかとなった。・臨床病理検体を用いたムチン遺伝子発現とエピジェネティクス変化の比較検討:ごく最近、従来までのDNAメチル化検出限界5%を超える0.1%の感度を有し、安価でパターン解析にも優れた新規メチル化検出法の開発に成功し、臨床病理検体を用いて各ムチンの遺伝子発現過程におけるDNAメチル化のより詳細な解析を行えるようになった。

This year, we will conduct research on early diagnosis, identification of possible therapeutic strategies, and the construction of diagnostic systems for biliary tract tumors. At the same time, the correct diagnosis can be found in the report of abnormal high occurrence in MUC3, MUC16 and MUC17. MUC3, MUC16, MUC17 detection mechanism analysis: lung cancer, breast cancer, colorectal cancer cell lines, MUC3, MUC16, MUC17 positive and negative cell lines in each of the use of different cell lines, the use of different cell lines in the whole field of genetic analysis, the use of quantitative analysis of DNA sequencing analysis. MUC3 and MUC17 are in the middle of the game, and the game is in the middle of the game. 1) MUC3 gene sequence analysis begins with DNA sequencing and control. 2)MUC16, 5-Azad C, 5-Azad C, 5 - 5-Azad C, 5-Azad C, 5 - 5-Azad C 3) MUC17 is related to the chemical modification of MUC17, the possibility of DNA synthesis, DNA synthesis, and the chemical modification of MUC17. Comparative study of clinical pathology model: Recent, recent DNA detection limit 5%> 0.1% sensitivity, safety analysis, optimization, new DNA detection method development success, clinical pathology model use, DNA detection limit 5%> 0.1% sensitivity.