Role of extracellular enzymes for the development, maintenance and degradation of biofilms

Bisher konnte gezeigt韦尔登，将铜绿假单胞菌置于生物膜中，并在生物膜基质中从胞外聚合物（EPS）中培养。铜绿假单胞菌基因组测序的结果是一个全球性的EPS蛋白质组分析。因此，我们可以通过二维电泳和质谱鉴定EPS蛋白。酶在膜中的分离，通过超滤分离、生化和免疫学特性以及电子显微镜观察韦尔登，可以得到韦尔登的证实。对生物膜韦尔登的增菌和抑菌作用的研究表明：（1）生物膜韦尔登具有酶致突变、生物化学和激光共聚焦扫描等特性;（2）酶-报告基因-融合的辅助功能可对酶基因进行跨膜调节。生物膜可以在琼脂培养基上生长，也可以在培养液中生长，这取决于培养酶的动力学和生物膜培养的效果。

Bisher konnte gezeigt werden, dass Pseudomonas aeruginosa unter Biofilm-Bedingungen extrazelluläre Enzyme bilden und in die Biofilm-Matrix aus extrazellulären polymeren Substanzen (EPS) sekretiert. Die verfügbar gewordene Genomsequenz von P. aeruginosa erlaubt jetzt eine globale Analyse des EPS-Proteoms. Hierzu sollen die EPS-Proteine mit zweidimensionaler Elektrophorese aufgetrennt und massenspektrometrisch identifiziert werden. Die Sekretion von Enzymen in Membranvesikeln, welche durch Ultrazentrifugation isoliert, biochemisch und immunologisch charakterisiert und elektronenmikroskopisch visualisiert werden, soll ebenfalls untersucht werden. Zur Klärung der Rolle extrazellulärer Enzyme für Aufbau und Abbau von Biofilmen werden zwei Ansätze gewählt: (1) Biofilme werden mit Enzymdefektmutanten angezüchtet, dann biochemisch und mit dem konfokalen Laser-Scanning-Mikroskop charakterisiert; (2) mit Hilfe von Enzym-Reportergen-Fusionen wird die transkriptionelle Regulation der Enzymgene untersucht. Die Biofilme werden auf Agar-Nährmedien und in Durchflusszellen angezüchtet, damit die Kinetik der Bildung extrazellulärer Enzyme und der Biofilm-Bildung bestimmt werden kann.