权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

悪性高熱症素因者新規同定法の開発

开发一种新方法来识别易患恶性高热的人

基本信息

批准号：
21791473
负责人：
成田弥生
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Kansai Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21791473/
关键词：
悪性高熱症樹状細胞免疫学麻酔学

项目摘要

健常人末梢血単核球より磁気分離したCD14陽性モノサイトにIL-4とGM-CSFを加えることでヒトモノサイト由来樹状細胞(Mo-DCs)を誘導した。この未熟な状態の樹状細胞(iDC)に、DCの成熟因子であるLPSあるいはプロスタグランジンE_2(PGE_2)+TNFαを添加し、機能的に異なる2種類の成熟DCを誘導した。これらiDC、LPS-DC、PGE_2-DCにおけるリアノジン受容体(ryanodine receptors:RyRs)サブタイプ(1-3型)の遺伝子の発現をRT-PCR法にて評価した。その結果、ヒトDCは1型リアノジン受容体(RyR1)遺伝子を選択的に発現していた。特にiDCは成熟誘導された2種類のDCよりも遺伝子発現量が高いことが明らかとなった。また、Fura-2標識したiDCを、RyRアゴニストである4-chloro-m-cresol(4-CmC)、またはATPを用いて刺激し、これにより誘導される細胞内Ca2+上昇を蛍光レシオイメージング法にて評価した。その結果、iDCは4-CmCおよびATP刺激に対して、細胞内Ca2+ストアに由来する一過性の細胞内Ca2+上昇を示した。この現象は、RyR阻害薬であるダントロレンによって阻害されたが、IP_3受容体阻害薬であるゼストスポンギンCでは阻害効果が認められなかった。また、RyR1を介したCa2+シグナルは、LPSによって誘導されるDCのIL-10産生を抑制し、HLA-DRとCD1d、CD86分子の発現上昇を誘導することで、アロナイーブT細胞刺激活性を亢進させた。以上より、ヒトDCは機能的なRyR1を発現し、これを介したCa2+シグナルによってDC応答が制御されることが示唆された。RyRアゴニスト刺激により特異的に誘導されるDC由来の液性因子は認められなかったが、DCは悪性高熱症素因者同定のターゲット細胞であることが明らかとなった。

Healthy human peripheral blood mononuclear cells (CD14) were magnetically isolated and induced by IL-4 and GM-CSF. In immature dendritic cells (iDC), maturation factors of DC were induced by LPS, E_2(PGE_2)+TNFα, and functional differences were observed in two types of mature DC. RT-PCR method was used to evaluate the development of ryanodine receptors (RyRs) from iDC, LPS-DC and PGE_2-DC. As a result, the DC-1 receptor (RyR1) was found in the selected receptor. In particular, iDC maturity induction is the highest in two species of DC. The intracellular Ca2 + elevation induced by Fura-2, 4-chloro-m-cresol(4-CmC), and ATP was evaluated by light microscopy. The results showed that iDC responded to 4-CmC and ATP stimulation, and the intracellular Ca2 + concentration increased transiently. This phenomenon, RyR resistance, IP_3 resistance, resistance In addition, RyR1-mediated Ca2 +-mediated inhibition of IL-10 production by DC induced by LPS, induction of increased production of HLA-DR, CD1d, and CD86 molecules, and enhancement of T cell-stimulating activity. The above mentioned RyR1 functions are displayed in the Ca2 + solution. RyR can stimulate the specific induction of DC-derived fluid factors, and DC can induce hyperthermia.