脊椎動物卵成熟過程におけるサイクリンB mRNAの翻訳制御機構の解析

減数分裂の第一前期で停止した卵母細胞(未成熟卵)が、ホルモン刺激により減数分裂を再開することで受精可能な卵(成熟卵)ができる。卵成熟の最終的な引き金となるサイクリンB mRNAの翻訳制御機構を解明することである。前年度までの解析から、Pumlは卵成熟過程でリン酸化によるバンドのシフトアップが見られ、サイクリンBの翻訳は、サイクリンB mRNAに特異的に結合するPumlのリン酸化が引き金となることが示唆されていた。そこで、質量分析を用いたリン酸化部位同定を行い、Pumlの799、801、802、804、805、808、810、811番目のセリンおよび812番目のトレオニンがリン酸化されるという結果を得た。今後、これらに変異を入れたPumlの卵成熟過程での挙動を詳細に観察することで、サイクリンB翻訳制御機構の解明の為の大きな手がかりが得られるものと期待される。前年度までにlaser capture microdissection法を用いて同定した、新規サイクリンB mRNA翻訳調節の候補タンパク質4種(K06A9.1b、novel rhamnose binding lectin;RBL、serum amiloid p component;SAPC、tatrophilin-2)について解析を行った。その結果、SAPCが卵母細胞中でサイクリンB mRNAと似た局在を示し、その強制発現で卵成熟が抑制された。また、ショ糖密度勾配法において、サイクリンB mRNAと同じ画分に存在するタンパク質について質量分析による解析を行った。その結果、さらなる新規サイクリンB mRNA翻訳調節の候補タンパク質としてInsulin-like growth factor 2 mRNA-binding proteinなど数種のタンパク質を得た。

減数分裂の第一前期で停止した卵母細胞(未成熟卵)が、ホルモン刺激により減数分裂を再開することで受精可能な卵(成熟卵)ができる。卵成熟の最終的な引き金となるサイクリンB mRNAの翻訳制御機構を解明することである。前年度までの解析から、Pumlは卵成熟過程でリン酸化によるバンドのシフトアップが見られ、サイクリンBの翻訳は、サイクリンB mRNAに特異的に結合するPumlのリン酸化が引き金となることが示唆されていた。そこで、質量分析を用いたリン酸化部位同定を行い、Pumlの799、801、802、804、805、808、810、811番目のセリンおよび812番目のトレオニンがリン酸化されるという結果を得た。今後、これらに変異を入れたPumlの卵成熟過程での挙動を詳細に観察することで、サイクリンB翻訳制御機構の解明の為の大きな手がかりが得られるものと期待される。前年度までにlaser capture microdissection法を用いて同定した、新規サイクリンB mRNA翻訳調節の候補タンパク質4種(K06A9.1b、novel rhamnose binding lectin;RBL、serum amiloid p component;SAPC、tatrophilin-2)について解析を行った。その結果、SAPCが卵母細胞中でサイクリンB mRNAと似た局在を示し、その強制発現で卵成熟が抑制された。また、ショ糖密度勾配法において、サイクリンB mRNAと同じ画分に存在するタンパク質について質量分析による解析を行った。その結果、さらなる新規サイクリンB mRNA翻訳調節の候補タンパク質としてInsulin-like growth factor 2 mRNA-binding proteinなど数種のタンパク質を得た。