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全身投与を目指したハイブリッド型化学修飾核酸の創製と核酸医薬への展開

创建用于全身给药的混合化学修饰核酸和核酸药物的开发

基本信息

批准号：
10J01717
负责人：
高橋真由美
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J01717/
关键词：
2'-OMe-4'-チオ核酸 siRNA AMO ヌクレアーゼ抵抗性持続性 microRNA(miRNA)

项目摘要

本研究では、全身投与可能な化学修飾核酸の開発と核酸医薬創製研究への展開を目的として、ヌクレアーゼ抵抗性とRNAへの高い親和性を兼ね備えた2'-置換-4'-チオ核酸を用いて、in vitroからin vivoまでの生体機能制御法への応用を目指す。【1】高いRNAi効果と持続性を兼ね備えたsiRNAこれまでに我々は2'-OMe-4'-チオ核酸修飾型siRNAが天然型と同等の活性を持ちながら、天然型よりも40%高い持続性を示すsiRNAの修飾様式を見いだしている。このsiRNAの細胞内残存量をqRT-PCRにより定量して比較した結果、トランスフェクション後2日目において天然型より3倍高い量の修飾型siRNAが検出された。さらに6日目にはこの差が15倍以上となった。従って、細胞内におけるsiRNAの安定性がRNAi活性の持続性に関与していることが示唆された。さらに、in vivoでの修飾型siRNAの活性と自然免疫応答の評価の結果、2'-OMe-4'-チオ核酸修飾型siRNAが高い活性をもち、また、自然免疫応答を引き起こさないということも明らかにした。【2】microRNAを標的とするアンチセンス核酸(AMO)miR-21またはmiR-122を標的にした様々な修飾様式の2'-置換-4'-チオ核酸および2'-置換型核酸修飾型AMOを用いて細胞内におけるAMOの活性を評価した。その結果、2'-OMe-4'・-チオ核酸修飾型AMOが、2'-OMe修飾型AMOよりも高く、持続的なmiRNA抑制効果を示した。2'-OMe修飾型AMOは現在分子生物学研究のツールとして広く用いられているが、これより高い効果を示した2'-OMe-4'-チオ核酸修飾型AMOは研究ツールに留まらず、核酸医薬開発まで幅広く応用できることが期待できる。

This study is aimed at developing the development of chemically modified nucleic acids for systemic administration and possible development of nucleic acid drug creation research. It is aimed at developing the use of 2'-substitution-4'-substitution nucleic acids for resistance and high affinity of RNA, in vitro and in vivo, as well as in biological function control methods. [1] The high level RNAi gene has the same activity as the natural type, and the high level RNAi gene has the same activity as the natural type. The high level RNAi gene has the same activity as the natural type. The high level RNAi gene has the same activity as the natural type. qRT-PCR was used to quantify the amount of siRNA remaining in the cells. Two days after treatment, a 3-fold higher amount of modified siRNA was detected than the native siRNA. The difference between the two is more than 15 times. The stability of siRNA in cells is related to the persistence of RNAi activity. The results of the evaluation of the activity and natural immune response of modified siRNAs in vivo showed that the activity of 2'-OMe-4'-OMe nucleic acid modified siRNAs was high, and the natural immune response was high. [2] MicroRNA targeting miRs-21 and miRs-122 targeting and modification of 2'-substitution-4'-substitution nucleic acid and 2'-substitution nucleic acid modification of AMO in vivo to evaluate AMO activity. The results showed that 2'-OMe-4'-OMe nucleic acid modified AMO, 2'-OMe modified AMO and 2'-OMe modified AMO had high and persistent miRNA inhibition effects. 2'-OMe modified AMO is currently used in molecular biology research.