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蛍光を用いたPKCリガンドの2段階結合評価系の構築とバイオセンサーへの応用

PKC配体荧光两步结合评价体系的构建及其在生物传感器中的应用

基本信息

批准号：
10J02617
负责人：
大橋南美
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

蛍光を用いたPKCリガンドの2段階階評価系の構築とバイオセンサーへの応用を目的とし、蛍光標識したPKCリガンド結合ドメイン(C1b)を用いる評価系のリガンド結合検出感度の向上を試みた。蛍光性δC1bを基にした評価系では、リガンド結合に伴う環境応答性蛍光基近傍の環境変化に起因する蛍光強度の増大によりリガンドの結合を検出する。なので、リガンド結合ポケットと蛍光基の距離が検出感度に影響すると考えた。そこで、リガンド結合ポケットと蛍光基の距離の最適化を行うためのリンカー長を変えた新たな蛍光性δC1bの作製に用いる蛍光修飾されたアミノ酸誘導体の合成に着手した。これまで作成した蛍光性δC1bのリンカー長(1nm)を参考に、αCから0.3nm-1.5nm離れた側鎖部分に蛍光基を有する蛍光性Fmocアミノ酸を合成した。既存の蛍光性δC1bよりも短い0.6nmのリンカーを有する蛍光性δC1bを作成し、[^3H]PDBuを用いた競合阻害実験行ったところwild typeと同等の[^3H]PDBu結合活性を示した。また、競合阻害実験において実際にリガンドと結合している分子の割合をwildtypeを基準に算出したところ、既存の蛍光性δC1bは10%なのに対し0.6nmリンカーを有する蛍光性δC1bは48%であることから、リンカー長を短くしたことでリガンド結合能を有するフォールディング状態の安定性が向上したと考えられる。蛍光性δC1bの構造安定性は評価系の再現性に大きく影響するため、これらの結果は蛍光性δC1bを用いる評価系を実用化するうえで重要な知見である。

The construction of the two-stage evaluation system of the light source, the purpose of the light source, the combination of the light source and the light source (C1b), the evaluation system of the light source and the sensitivity of the light source The evaluation based on the illuminance δ C1b can be based on the combination of various illuminance factors that are associated with the increase in illuminance intensity caused by environmental changes near the illuminance factor. The distance between the light base and the detector has an influence on the sensitivity. The synthesis of the new optically active δ C1b was carried out by optimizing the distance between the two groups. This is why the optically active δ C1b is so long (1 nm) that the reference, α C is so long (0.3 nm-1.5 nm) that the optically active Fmoc is so long that the optically active Fmoc is so short that it can be synthesized. The existing optical properties δ C1b are 0.6 nm and the optical properties δ C1b are 0.6 nm and the optical properties δ C1b are 0.6 nm and the optical properties δ C1b are 0.6 nm. The optical properties δ C1b of the existing molecules are calculated based on the wildtype of the molecules in the binding state. The optical properties δ C1b of the existing molecules are calculated based on the wildtype of the molecules in the binding state. The optical properties δ C1b of the existing molecules are calculated based on the wildtype of the molecules in the binding state. The optical properties δ C1b of the existing molecules are calculated based on the wildtype of the molecules in the binding state. The structural stability of optical δ C1b has a great influence on the reproducibility of the evaluation system.

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Synthetic caged DAG-lactones for photochemically controlled activation of protein kinase C.

用于光化学控制蛋白激酶的光化学激活的合成笼式dag-lactones。

DOI：
10.1002/cbic.201000670
发表时间：
2011-03-07
期刊：
Chembiochem : a European journal of chemical biology
影响因子：
0
作者：
Nomura W;Narumi T;Ohashi N;Serizawa Y;Lewin NE;Blumberg PM;Furuta T;Tamamura H
通讯作者：
Tamamura H

環境応答性蛍光基を活用したPKCリガンドのorthogonal screening methods

使用环境响应荧光基团的 PKC 配体的正交筛选方法