内分泌細胞に富む消化管オルガノイドの開発と消化管ホルモンの分泌調節因子の解明

富含内分泌细胞的胃肠类器官的开发和胃肠激素分泌调节剂的阐明

• 批准号: 21K05941
• 负责人: 翁長 武紀
• 金额: $ 2.16万
• 依托单位: Rakuno Gakuen University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K05941/
• 关键词: Xenin; 内分泌細胞; オルガノイド; 胃オルガノイド; 小腸オルガノイド; 消化管ペプチド; 腸内分泌細胞; 刺激分泌連関; バイオセンサー

昨年度の報告書に記載した今後の方針に基づいて①胃および②十二指腸粘膜をコラゲナーゼ処理で分散した細胞塊と、③十二指腸粘膜をCa2+キレート法により分散した細胞塊をそれぞれ48穴プレート内のマトリゲルに播種し、Satoら(2018)の報告に基づいたDMEM/F12を基本液とする通常の増殖用培養液で培養した。基本的に胃の細胞培養にはGastrinとFGF-10を添加し、十二指腸の細胞培養にはIGF-IとFGF-2を添加した。増殖用培養液にはマウスrecombinant Wnt3a（mr-Wnt3A）を使用した系とAfamin-Wnt3aを使用した系の2系列を調製し、a.増殖用培養液のみ、b.ニコチンアミド添加、c.ニコチンアミドおよびRHOK-inhibitorであるY-27632の添加条件で培養した。しかし、いずれにおいてもオルガノイドの形成はみられなかったため、途中で培養液のmr-Wnt3a、Afamin-Wnt3aおよびR-spondinの濃度を修正して培養を続けた。さらに新規に細胞を分離して、上記の2系統の基本培養液に加えてY-27632や、p38 MAP kinase inhibitorであるSB202190、GSK inhibitorであるCHIR 99021の添加の有無による細胞増殖への効果も検討したが、いずれもオルガノイドの形成には至らなかった。そこで、上記の無血清培地ではなく、10%ウシ胎仔血清を含むDMEM/F12とL-WRN(Wnt, R-spondin, Noggin)調整培養液を混和したMiyoshiら(2013)の培養方法を基本として、上記の3因子の添加の有無を比較する方法でも同様に検討したが、やはり内分泌細胞に富むオルガノイドを誘導できなかった。培養実験は何れも複数回行ったが、目的とするようなオルガノイドの作製まで至っていない。

The report of yesterday's annual report has been recorded in the future. In the future, we need to learn more about the distribution of cancer cells in the tissues of the stomach, the mucosa of the stomach, the distribution of the cells, the Ca2+ of the mucous membrane, the distribution of the cells, the temperature of 48 points, the temperature of the cells, the temperature of the cells, the temperature of the stomach, the temperature of the cell, the temperature, and the temperature. Sato (2018) report that the basic liquid of DMEM/F12 is usually used for breeding. Basic stomach cell culture, cell culture, IGF-I cell culture, cell culture, FGF-2, cell culture, cell culture and FGF-2. The culture liquid for colonization uses the liquid of recombinant Wnt3a (mr-Wnt3A) to use the Afamin-Wnt3a of the system to use the product of the second series of products, a. The culture liquid for breeding was used to culture, b. Please add, c. Please add a condition to RHOK-inhibitor 27632 and add a condition to it. Please tell me what to do. Please tell me that you need to know how to use mr-Wnt3a, Afamin-Wnt3a, R-spondin, and so on. In the new regulation, the basic culture solution of the 2-system system is separated and added. Y27632, p38 MAP kinase inhibitor SB202190, and GSK inhibitor CHIR 99021 are added. The results show that there is a significant difference between the two groups. The whole culture solution containing DMEM/F12 L-WRN (Wnt, R-spondin, Noggin) was mixed with the whole culture solution of Miyoshi (2013). There were three factors in the culture method. Please tell me how to copy the data back to the computer, and the purpose is to make a copy of the data.