難治性痒みの発生機序の解明と臨床応用への試み

当初、1)正常ヒト表皮角化細胞(NHEK)での痒み関連物質産生の制御機構の解析及び2)痒み関連物質の知覚神経線維に対する影響について検討することを予定していた。しかし、東日本大震災の影響により、研究計画の変更、遅延が生じた。また、本年度は海外渡航先で最先端のかゆみ研究の技術及び知識を学び、申請書に記載した手法とは異なる電気生理学的アプローチで、マウス脊髄における痒み伝達様式の解明を目指した。1)NHEKでの痒み関連物質産生の制御機構の解析:表皮内神経の稠密化に関与するSemaphorin 3A(Sema3A)の発現は、AD表皮で低下する。この発現低下機序を解明するため、NHEKを様々なサイトカインで24時間刺激し、ウェスタンブロッティングでSema3Aの発現量を検討した。その結果、コントロール群と比較し、AD病態に関与するTSLP及びTNF-alphaで処理したNHEK群でSema3A発現が低下した。2)起痒物質の1次知覚神経に対する影響:マウス後根神経節(DRG)細胞を培養し、様々な起痒物質で刺激後、細胞内カルシウム流入変化をFura-2AMで検出した。その結果、PAR-2アゴニストでのDRG細胞内カルシウム流入がクロロキン(CQ)及びBAM8-22によって増強された。3)電気生理学的記録法によるマウス脊髄における痒み伝達機序の解明起痒物質CQをマウス足底に皮内投与し、細胞外記録法で脊髄CQ応答細胞の特性化を行った。次に、脊髄CQ応答細胞に着目し、NK1R、GlutamateR、GRPRアンタゴニストを脊髄灌流系内に投与し、各受容体系が脊髄での痒み伝達機序にどの程度関与するかについて検討した。現在、特許及び論文化に向けて準備中であるため、本研究の詳細は記載できない。このように、本研究は異なる側面から痒みを基礎的に研究し、末梢レベル(皮膚及び1次知覚神経)での痒み増強機構、中枢レベル(脊髄)での痒み伝達様式の一端を解明できる可能性を秘めている。

当初、1)正常ヒト表皮角化細胞(NHEK)での痒み関連物質産生の制御機構の解析及び2)痒み関連物質の知覚神経線維に対する影響について検討することを予定していた。しかし、東日本大震災の影響により、研究計画の変更、遅延が生じた。また、本年度は海外渡航先で最先端のかゆみ研究の技術及び知識を学び、申請書に記載した手法とは異なる電気生理学的アプローチで、マウス脊髄における痒み伝達様式の解明を目指した。1)NHEKでの痒み関連物質産生の制御機構の解析:表皮内神経の稠密化に関与するSemaphorin 3A(Sema3A)の発現は、AD表皮で低下する。この発現低下機序を解明するため、NHEKを様々なサイトカインで24時間刺激し、ウェスタンブロッティングでSema3Aの発現量を検討した。その結果、コントロール群と比較し、AD病態に関与するTSLP及びTNF-alphaで処理したNHEK群でSema3A発現が低下した。2)起痒物質の1次知覚神経に対する影響:マウス後根神経節(DRG)細胞を培養し、様々な起痒物質で刺激後、細胞内カルシウム流入変化をFura-2AMで検出した。その結果、PAR-2アゴニストでのDRG細胞内カルシウム流入がクロロキン(CQ)及びBAM8-22によって増強された。3)電気生理学的記録法によるマウス脊髄における痒み伝達機序の解明起痒物質CQをマウス足底に皮内投与し、細胞外記録法で脊髄CQ応答細胞の特性化を行った。次に、脊髄CQ応答細胞に着目し、NK1R、GlutamateR、GRPRアンタゴニストを脊髄灌流系内に投与し、各受容体系が脊髄での痒み伝達機序にどの程度関与するかについて検討した。現在、特許及び論文化に向けて準備中であるため、本研究の詳細は記載できない。このように、本研究は異なる側面から痒みを基礎的に研究し、末梢レベル(皮膚及び1次知覚神経)での痒み増強機構、中枢レベル(脊髄)での痒み伝達様式の一端を解明できる可能性を秘めている。