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大脳皮質形成に関わるRhoファミリーG蛋白質活性制御因子の探索とその機能解析

大脑皮层形成中涉及的Rho家族G蛋白活性调节因子的寻找及其功能分析

基本信息

批准号：
10J04616
负责人：
竹内真吾
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2012
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J04616/
关键词：
RhoファミリーG蛋白質 GEF 大脳皮質 in utero electroporation 放射性移動 in situ hybrudization

项目摘要

大脳皮質を構成する神経細胞の数は神経前駆細胞の増殖と神経細胞への分化のバランスにより.厳密に決められている。また分化した神経細胞は適切な場所へと移動し、そこで層構造を形成する。近年、RhoファミリーG蛋白質が神経前駆細胞の増殖・神経細胞への分化および神経細胞の移動に重要な役割を担っているということが報告された。しかし、これらの過程におけるRhoファミリーG蛋白質を活性化する因子(GEF)および不活性化する因子(GAP)についてはほとんど分かっていない。そこで本研究は大脳皮質形成に関わるRhoファミリーG蛋白質活性制御因子の探索とその機能解析を目的としている。前年度の研究ではCdc42のGEFであるTubaをノックダウンすると神経前駆細胞から生まれて分化した神経細胞の放射状移動が遅れることがわかった。今年度はこれらの異常が本当にTubaのノックダウンによるものなのかを詳細に検討した。TubaのRNAiに対して耐性を持つ変具体を作成し、これを用いてレスキュー実験を行ったが、Tubaのノックダウンによる放射状移動の遅れが解消されることはなかった。一方でTubaの野生型を単独で発現させても放射状移動の遅れが起こることから、レスキュー実験ではTubaを適切な範囲内で発現させる必要があることが考えられた。そこでRNAi耐性Tubaのプラスミド量や発現ベクターのプロモーターを変えてレスキュー実験を行った。しかし、それでもTubaのノックダウンによる放射状移動の遅れは解消されることはなかった。そのためこの放射状移動の遅れはRNAiのオフターゲットによるものだと考え、研究を中断した。次に別のRhoGEFを検討することにした。その候補と、して上がったのがDock180である。Dock180は大脳皮質の神経前駆細胞および神経細胞に発現していたので大脳皮質形成に関わっていることが示唆された。そこでinuteroelectroporation法により大脳皮質でDock180をノックダウンすると、神経細胞の放射状移動の抑制が観察された。現在はこの異常について詳細に検討しているところである。

The cortex of the large body consists of the number of cells and the proliferation and differentiation of the cells in front of the body. Differentiation of cells, movement of cells in appropriate locations, and formation of layered structures. In recent years, the proliferation and differentiation of RhoFamily G protein and pre-cancer cells have beenおよび神経手机の Important なservice cut を聣ているということが report された. G protein activation factor (G) EF) および inactivation factor (GAP) についてはほとんど分かっていない. The purpose of this study is to explore the factors that control the activity of G protein in the formation of large cortical cortex and to analyze the functions of the Rhodolin G protein. Previous year's research on Cdc42's GEF research The former cells are differentiated and differentiated, and the cells move radially. This year's annual special event is a very special one. Tuba's RNAi is durable and durable.行ったが、Tubaのノックダウンによる radially move the の遅れが dissolve the されることはなかった. One side's Tuba's wild type を単 unique で発appears させてもradial movement の遅れが出こることから、レスキュー実験ではTubaをappropriateな法囲内で発appearsさせるnecessaryがあることが考えられた.そこでRNAi resistance tube tubeターのプロモーターを変えてレスキュー実験を行った.しかし、それでもTubaのノックダウンによる radially move the の遅れは dissolve the されることはなかった.そのためこのradial movementのぅれはRNAiのオフターゲットによるものだとtestえ、Researchをinterruptionした. The second time is no RhoGEF.その candidateと、して上がったのがDock180である. Dock180は大脳Cortex の神経前槆 cells および神経外围 Cells に発 appear していたので大脳Cortex Formation に关わっていることが Show 唆された.そこでinuteroelectroporation methodにより大脳CortexでDock180をノックダウンすると、Suppression of the radial movement of the nerve cellsが観看された. Now it's abnormal and it's detailed and detailed.