大脳皮質形成に関わるRhoファミリーG蛋白質活性制御因子の探索とその機能解析

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大脳皮質を構成する神経細胞の数は神経前駆細胞の増殖と神経細胞への分化のバランスにより.厳密に決められている。また分化した神経細胞は適切な場所へと移動し、そこで層構造を形成する。近年、RhoファミリーG蛋白質が神経前駆細胞の増殖・神経細胞への分化および神経細胞の移動に重要な役割を担っているということが報告された。しかし、これらの過程におけるRhoファミリーG蛋白質を活性化する因子(GEF)および不活性化する因子(GAP)についてはほとんど分かっていない。そこで本研究は大脳皮質形成に関わるRhoファミリーG蛋白質活性制御因子の探索とその機能解析を目的としている。前年度の研究ではCdc42のGEFであるTubaをノックダウンすると神経前駆細胞から生まれて分化した神経細胞の放射状移動が遅れることがわかった。今年度はこれらの異常が本当にTubaのノックダウンによるものなのかを詳細に検討した。TubaのRNAiに対して耐性を持つ変具体を作成し、これを用いてレスキュー実験を行ったが、Tubaのノックダウンによる放射状移動の遅れが解消されることはなかった。一方でTubaの野生型を単独で発現させても放射状移動の遅れが起こることから、レスキュー実験ではTubaを適切な範囲内で発現させる必要があることが考えられた。そこでRNAi耐性Tubaのプラスミド量や発現ベクターのプロモーターを変えてレスキュー実験を行った。しかし、それでもTubaのノックダウンによる放射状移動の遅れは解消されることはなかった。そのためこの放射状移動の遅れはRNAiのオフターゲットによるものだと考え、研究を中断した。次に別のRhoGEFを検討することにした。その候補と、して上がったのがDock180である。Dock180は大脳皮質の神経前駆細胞および神経細胞に発現していたので大脳皮質形成に関わっていることが示唆された。そこでinuteroelectroporation法により大脳皮質でDock180をノックダウンすると、神経細胞の放射状移動の抑制が観察された。現在はこの異常について詳細に検討しているところである。