新型豚由来H1N1ウイスルにおけるPB1-F2タンパク質の宿主への影響

新型猪源H1N1病毒中PB1-F2蛋白对宿主的影响

• 批准号: 10J04699
• 负责人: 高野 量
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J04699/
• 关键词: インフルエンザ; PB1-F2タンパク質; 質量分析; インターフェロン; qRT-PCR; siRNAスクリーニング; インターフェロンβ

PB1-F2タンパク質発現ミュータントであるウイルスをリバースジェネティクス法により作出した.作出したウイルスのウイルス学的特徴を調べるべく,これらのウイルスをヒト腎臓由来細胞株であるHEK293細胞に感染させ,遺伝子発現量の違いをqRT-PCR法により解析した.その結果,野生型PB1-F2タンパク質を有するウイルス株は,それが短い・あるいは完全に欠損している変異株と比べて,有意にインターフェロンベータ(IFN-β)の発現を強く誘導することが判明した.一方で,感染細胞内において,PB1-F2と相互作用する宿主因子を探索すべく,PB1-F2タンパク質を強制発現した細胞において免疫沈降を行った後,LC-MS質量分析器を用いて解析を行ったところ,90個の新規宿主タンパク質が同定された.感染細胞内においてPB1-F2タンパク質と相互作用し,かつIFN-βの発現に関与するタンパク質を同定するために,PB1-F2タンパク質発現ミュータントと,野生株のインフルエンザウイルスを用いて,LC-MSで同定された宿主因子をsiRNAを用いてノックダウンさせた細胞において,それぞれのウイルスを感染させ,IFN-βの遺伝子発現量をqRT-PCR法により測定した.いずれの宿主因子をノックダウンした細胞においても,IFN-βの遺伝子発現量に大きく影響する因子は同定されなかった.これらの知見から,PB1-F2タンパク質は感染細胞内において,IFN-β誘導能を示すものの,同定されたPB1-F2と相互作用する宿主因子によって介されるIFN-βの発現誘導形態を取らないことが示唆された.先行研究から,新型インフルエンザウイルスにおいて,PB1-F2を保持する変異体が,野生株と大きな哺乳類への病原性の変化を示さないことが判明しており,PB1-F2タンパク質の宿主への病原性への寄与は大きくないことが示唆された.これらの結果から,新型豚由来HINIウイルスにおいて,PB1-F2タンパク質が,宿主応答へ大きな影響を持たないことが示され,新型ウイルスの強毒化にPB1-F2タンパク質が寄与するかという本研究の目的は達成された.

PB1-F2 is the most important component of the system. The gene expression of HEK293 cells was analyzed by qRT-PCR after infection with HEK293 cells. As a result, wild-type PB1-F2 was found to have a strong induction of IFN-β production, although it was found to be short and incomplete. In one case, PB1-F2 interaction in infected cells was explored. PB1-F2 interaction in infected cells was detected. After immune sedimentation in infected cells,LC-MS mass analyzer was used to analyze 90 new host factors. PB1-F2 is the same as PB1-F2 in the production of IFN-β, PB1-F2 is the same as PB1-F2 in the production of IFN-β. IFN-β mRNA production was determined by qRT-PCR. The host factors in these cells are closely related to IFN-β gene production. The PB1-F2 protein was found to be able to induce IFN-β in infected cells, and the PB1-F2 protein was found to interact with host factors to mediate IFN-β induction. In the first study, the pathogenicity of PB1-F2 in mammalian host cells of novel strains was studied. The pathogenicity of PB1-F2 in mammalian host cells was studied. The results show that the new type of HINI is highly toxic, PB1-F2 is highly toxic, and the host system has a strong influence on the host system.

项目成果

Influenza A (H5N1) viruses from pigs, Indonesia.

• DOI: 10.3201/eid1610.100508
• 发表时间: 2010-10
• 期刊: Emerging infectious diseases
• 影响因子: 11.8
• 作者: Nidom CA;Takano R;Yamada S;Sakai-Tagawa Y;Daulay S;Aswadi D;Suzuki T;Suzuki Y;Shinya K;Iwatsuki-Horimoto K;Muramoto Y;Kawaoka Y
• 通讯作者: Kawaoka Y

Mutations in PA, NP, and HA of a pandemic (H1N1) 2009 influenza virus contribute to its adaptation to mice.

• DOI: 10.1016/j.virusres.2011.03.022
• 发表时间: 2011-06
• 期刊: Virus research
• 影响因子: 5
• 作者: Sakabe S;Ozawa M;Takano R;Iwastuki-Horimoto K;Kawaoka Y
• 通讯作者: Kawaoka Y

新型インフルエンザ(pdm H1N1 2009)ウイルス

新型流感（PDM H1N1 2009）病毒

• 发表时间: 2010
• 期刊: PROGRESS IN MEDICINE
• 作者: 高野量;河岡義裕
• 通讯作者: 河岡義裕

Enhanced Growth of Influenza Vaccine Seed Viruses in Vero Cells Mediated by Broadening the Optimal pH Range for Virus Membrane Fusion

• DOI: 10.1128/jvi.06009-11
• 发表时间: 2012-02-01
• 期刊: JOURNAL OF VIROLOGY
• 影响因子: 5.4
• 作者: Murakami, Shin;Horimoto, Taisuke;Kawaoka, Yoshihiro
• 通讯作者: Kawaoka, Yoshihiro

H5N1インフルエンザウイルス高病原性発揮のメカニズム

H5N1流感病毒高致病性机制

• 发表时间: 2010
• 作者: 今井博貴;新矢恭子;高野量;木曽真紀;村本裕紀子;坂部沙織;村上晋;伊藤睦美;山田晋弥;Mai Quynh Li;坂井優子;高橋慧;大森康之;野田岳志;下島昌幸;角川学士;五藤秀男;岩附研子;堀本泰介;河岡義裕
• 通讯作者: 河岡義裕