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金属イオンの抗原提示に関わる自己タンパク質の同定

鉴定参与金属离子抗原呈递的自身蛋白

基本信息

批准号：
10J07366
负责人：
田中志典
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J07366/
关键词：
金属アレルギー抗原提示 LPS

项目摘要

金属イオンはアレルギー性接触皮膚炎のアレルゲンであり、中でもニッケルは最も頻度の高いアレルゲンとして知られている。金属イオンはキャリアーとなる自己タンパク質と結合してT細胞に抗原提示されると考えられているが、このキャリアータンパク質は未だ同定されていない。当研究室では、NiCl_2にLPsを併用(NiCl_2+LPS感作)することでマウスにNiアレルギーを起こすことに成功した。このことは、LPSがNiイオンのキャリアータンパク質を誘導する可能性を示唆する。そして、これまでの研究で、LPS投与後のマウス血清(LPS-血清)はin vivoアッセイで金属アレルギー促進活性を示すことが分かった。このin vivoアッセイでは、通常ではアレルギー反応を誘導しない低濃度(5μM以下)のNiCl_2溶液に被験サンプル(LPs-血清もしくはその精製画分)を混合してNi感作マウス耳介に皮下注射し、耳介の厚みを測定する。そして、耳介の腫脹が観察された場合、被験サンプルに金属アレルギー促進活性があると判定する。本年度は、LPS-血清中の金属アレルギー促進活性をもつ分子(キャリアータンパク質であることが予想される)の精製に取り組んだ。まず、LPS-血清をNiイオン結合カラムでアフィニティー精製したところ、Niイオンと結合する画分に金属アレルギー促進活性が検出された。この画分をゲルろ過クロマトグラフィーにより分画したところ、10kDa前後の画分(SDS-PAGEで確認)に金属アレルギー促進活性が検出された。今後はこの画分のさらなる精製を行い、金属アレルギー促進活性有する分子を同定したいと考えている。

The most frequent contact dermatitis is caused by the presence of metal in the skin. The metal is not in the same state as the metal. The metal is not in the same state as the metal. When NiCl_2 and LPS are used together in the laboratory (NiCl_2+LPS), it is successful to use NiCl_2 and LPS. The possibility of inducing such a reaction is indicated by LPS. In this study, LPS serum (LPS-serum) was administered in vivo to demonstrate the activity of metal promoters. In vivo, the reaction is usually induced by low concentration (5μM or less) of NiCl2 solution and mixed with NiCl2 solution to determine the thickness of NiCl2 by subcutaneous injection. When the swelling of the ear medium is observed, the metal is removed from the skin and the activity is determined. This year, LPS-serum metal oxide to promote the activity of the molecule ( LPS-binding activity is enhanced by the presence of a metal in the serum. The results of SDS-PAGE showed that the activity of metal ions was promoted by the reaction of metal ions with sodium hydroxide. In the future, the purification of these molecules will be carried out in the same way as the purification of metals.