NFκBの選択的な標的遺伝子活性化の機構に関する解析

NFκB选择性靶基因激活机制分析

• 批准号: 10J09328
• 负责人: 石坂 彩
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J09328/
• 关键词: NF-κB; SWI/SNF複合体; HIV-1; 転写制御

NF-κBは、免疫・炎症・発生・細胞増殖・アポトーシスやウイルスの増殖などに関与する転写因子である。これらを正しく制御するためにはNF-κBが標的遺伝子を選択的に活性化させる必要があるが、その機構の詳細については未解明な点が多い。近年我々の研究室では、クロマチン構造変換因子であるSWI/SNF複合体とNF-κB Re1B/p52ヘテロダイマーを仲介する新規のcofactorとしてDPF2(REQ)を同定した。DPF2はSWI/SNF複合体やp52と結合する性質があり、SWI/SNF複合体をRelB/p52依存的に標的プロモーターへ誘導することにより、NF-κBの非古典的経路の最下流で機能している。本研究ではNF-κBの新規のcoactivatorを同定することを目的として、DPF2の属するd4ファミリーの他のメンバーであるDPF1,DPF3a,DPF3bと、これらとC末端の構造が類似するPHF10が、代表的なNF-κBダイマーのcoactivatorとして機能するか否かを評価した。NF-κBとSWI/SNF複合体の両方に依存的に発現するレポーター細胞を構築して解析した結果、全ての候補がRelA/p50を含めた複数のNF-κBダイマーのcoactivatorとなりうる可能性が示唆された。その中でも、DPF3遺伝子からスプライシング様式の違いにより産生されるDPF3aおよびDPF3bはTNF-α刺激によって活性化されたRelA/p50ヘテロダイマーによるレポーター活性を最も強く誘導することから、NF-κBの古典的経路で働く有力なcoactivator候補であると考えた。In vitroの解析からDPF3a,DPF3bはどちらもSWI/SNF複合体の構成サブユニットやRelA、p50と直接結合し、TNF-α刺激後の核抽出液を用いた免疫沈降実験からこれらの相互作用は核内で起こっていることが分かった。HIV-1の野生型LTRを用いたクロマチン免疫沈降により標的遺伝子のプロモーター上での三者の挙動を解析すると、DPF3a/bとSWI/SNF複合体は定常的に動員されているのに対しRelA/p50はTNF-α依存的にLTR上へ動員されていた。このRelA/p50の動員のkineticsは転写亢進のkineticsとよく相関していた。このプロモーターの活性化にはSWI/SNF複合体とRelA/p50が揃う必要があり、両者を結び付けるDPF3a/bはcoactivatorとして重要な機能を担っていることが明らかとなった。

は nf-kappa B cells, immune inflammation, 発 raw, rights, colonization ア ポ ト ー シ ス や ウ イ ル ス の raised colonization な ど に masato and す る planning write factor で あ る. こ れ ら を is し く suppression す る た め に は nf-kappa B が mark heritage 伝 son を sentaku に activeness of さ せ る necessary が あ る が, そ の institutions の detailed に つ い て は not interpret な が い more. In recent years I 々 の laboratory で は, ク ロ マ チ ン structural variations in factor で あ る SWI/SNF complex と nf-kappa B Re1B/p52 ヘ テ ロ ダ イ マ ー を placement す る new rules の cofactor と し て DPF2 (the REQ) with fixed を し た. DPF2 は SWI/SNF complex や p52 と combining す る nature が あ り, SWI/SNF complex を RelB/p52 dependent に mark プ ロ モ ー タ ー へ induced す る こ と に よ り, nf-kappa B の the most mean で function of classical 経 road の し て い る. This study で は nf-kappa B の new rules の coactivator を with fixed す る こ と を purpose と し て, DPF2 の is す る d4 フ ァ ミ リ ー の he の メ ン バ ー で あ る DPF1, DPF3a, DPF3b と, こ れ ら と C terminal が の structure similar す る PHF10 が, representative な nf-kappa B ダ イ マ ー の co activatorと て て function する を no を evaluation 価 た た. Nf-kappa B と SWI/SNF complex の struck party に dependent に 発 now す る レ ポ ー タ を ー cells build し て parsing し た results, full て の alternate が RelA/p50 を containing め た plural の nf-kappa B ダ イ マ ー の coactivator と な り う が る possibility in stopping さ れ た. In そ の で も, DPF3 but 伝 か ら ス プ ラ イ シ ン グ others type の violations い に よ り produce さ れ る DPF3a お よ び DPF3b は TNF alpha stimulus に よ っ て activeness さ れ た RelA/p50 ヘ テ ロ ダ イ マ ー に よ る レ ポ ー タ ー activity the most strong も く を induced す る こ と か ら, nf-kappa B の classic 経 road で 働 く Force なcoactivator candidate であると exam えた. The In vitro の parsing か ら DPF3a, DPF3b は ど ち ら も SWI/SNF complex の constitute サ ブ ユ ニ ッ ト や RelA, p50 と し, TNF alpha directly stimulate の after nuclear extract を with い た immune sink be 験 か ら こ れ ら の は nuclear interaction within で up こ っ て い る こ と が points か っ た. HIV - 1 の wild type LTR を with い た ク ロ マ チ ン immune sink に よ り mark heritage 伝 son の プ ロ モ ー タ ー on で の three の 挙 dynamic analytical す を る と, DPF3a/b と SWI/SNF complex は stationary に mobilization さ れ て い る の に し seaborne RelA/p50 は TNF alpha dependent に LTR へ mobilization on さ れ て い た. <s:1> <s:1> RelA/p50 <s:1> mobilization <s:1> kinetics 転 転 writing hyperactivity <s:1> kineticsとよく related て て た た. こ の プ ロ モ ー タ ー の activeness に は SWI/SNF complex と RelA/p50 が Jian う necessary が あ り, struck を "び pay け る DPF3a/b は coactivator と し て important function of な を bear っ て い る こ と が Ming ら か と な っ た.

项目成果

RNA affinity tandem(RAT)purificationを利用したHIV-1 RNA結合因子の探索

使用 RNA 亲和串联 (RAT) 纯化搜索 HIV-1 RNA 结合因子

• 发表时间: 2010
• 作者: 水谷壮利;石坂彩;伊庭英夫
• 通讯作者: 伊庭英夫

Requiem protein links RelB/p52 and theBrm-type SWI/SNF complex in a noncanonicalNF-kappa B pathway.

Requiem 蛋白以非经典 NF-kappa B 途径连接 RelB/p52 和 Brm 型 SWI/SNF 复合体。

• 发表时间: 2010
• 期刊: J.Biol.Chem. 285
• 作者: Tando;T.;Ishizaka;A.;Watanabe;H.,Ito;T.;Iida;S.;Haraguchi;T.;Mizutani,T.;Izumi;T.;Isobe;T.;Akiyama;T.,Inoue;J.I.;Iba;H.
• 通讯作者: H.

SWI/SNF複合体依存的なRe1A/p50の転写活性化におけるDPF3aおよびDPF3bのcoactivatorとしての機能解析

DPF3a 和 DPF3b 作为 SWI/SNF 复合物依赖性 Re1A/p50 转录激活中共激活剂的功能分析

• 发表时间: 2012
• 作者: 石坂彩;伊庭英夫
• 通讯作者: 伊庭英夫