分離指向性の概念に基づくフルオラス誘導体化HPLC分析法の開発

基于分离方向性概念的氟衍生高效液相色谱分析方法的开发

基本信息

批准号：
10J09770
负责人：
坂口洋平
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Fukuoka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2012
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J09770/
关键词：
fluorous derivatization fluorous fluorescent derivatization HPLC biogenic amine LC-MS/MS LC-MS native fluorescent amine asymmetrical dimethylarginine symmetrical dimethylarginine native fluorescent carboxylic acid NSAIDs sialic acid

项目摘要

最終年度である本年度は、本研究で開発した、フルオラス誘導体化LC法の更なる付加価値化を進めた。まず一つ目に、(1)二つのフルオラス基を導入するバイナリーフルオラスアルキル化法の開発を行い、二つ目に、(2)蛍光誘導体化法とフルオラス誘導体化法を組み合わせたフルオラス蛍光誘導体化法の開発を行った。(1)生理活性(一級)アミン類(ドパミン、ノルエピネフリン、ノルメタネフリン、チラミン、3-メトキシチラミン、トリプタミン、セロトニン、5-メトキシトリプタミン及びヒスタミン)を分析対象とし、フルオラスアルデヒド試薬によるジフルオラスアルキル化を介して、それらのフルオラスLC-MS/MS分析を行った。本法では、対象の分子内に2つのフルオラス基が導入されるため、フルオラスカラムへ強力に保持される。そのため、試料爽雑成分のみならずモノフルオラス体(試薬自身あるいは2級アミン)との良好な分離も達成されることから、より高選択的・高精度な分析を行うことが可能である。基礎的条件の検討後、血漿中の生理活性アミン類分析へ適用し、本法の有用性を確認した。(2)フルオラス構造を有する蛍光誘導体化試薬(F-Fmoc-OSu)を用い、目的成分(アミン類)にフルオラス-蛍光誘導体化を行った。誘導体化後、未反応の誘導体化試薬に対し更にフルオラス構造を導入し、フルオラス固相抽出(F-SPE)を施すことで、他の蛍光物質や未反応試薬との分離が可能であり、目的成分の選択的分析が達成される。今回、NH3及び脂肪族一級アミン類(C1-C8)をモデル化合物として、本法の原理確認を行い、有用性について評価した。

今年，在最后一年，我们进一步增加了本研究中开发的迅速衍生化液晶方法的价值。首先，（1）开发了一种二元荧光烷基化方法，其中引入了两个荧光组，其次，（2）开发了一种荧光荧光衍生化方法，其中将荧光衍生化方法与荧光衍生化方法结合在一起。（1）分析了生物活性（原发性）胺（多巴胺，去甲肾上腺素，Normetonephrine，酪胺，3-甲氧基抑菌胺，色胺，5-羟色胺，5-甲氧氨基胺和组胺），并通过Difluoras Alkylate进行了氟化的LC-MS/MSS分析，并通过氟二胺进行了分析。在这种方法中，将两个荧光基团引入了感兴趣的分子中，因此它们在荧光柱上被强烈保留。因此，不仅可以从样品的清爽组成部分，还可以从单氟（试剂本身或二级胺）中实现良好的分离，这使得可以进行更具选择性和高度准确的分析。在检查了基本条件后，将结果应用于血浆中生理活性胺的分析，确认了该方法的有用性。（2）使用具有荧光结构的荧光衍生化试剂（F-FMOC-OSU），在目标成分（Amines）上进行荧光荧光衍生化。衍生化后，对未反应的衍生化试剂和易流的固相提取（F-SPE）引入荧光结构，以允许与其他荧光物质和未反应的试剂分离，并对目标成分进行选择性分析。在本文中，使用NH3和脂肪族原代胺（C1-C8）作为模型化合物来确认该方法的原理，并评估了有用性。