CAGリピート病におけるHAPI/STBの病態関与について

これまで脳内機能未知神経細胞質封入体stigmoid body(STB)およびその必須構成因子huntingtin-associated protein 1(HAP1)において、CAGリピート病を含む代表的神経変性疾患の原因分子との細胞内相互関連を検討し、病態発生に関与する疾患として脊髄小脳変性症3型(SCA3)の可能性を指摘してきた。そこで、STBがSCA3の細胞障害性に関与するかを検討するために、STBの必須構成因子huntingtin-associated protein 1(HAP1)とSCA3由来のpolyQ鎖伸長型ataxin-3(ATX3Q65)の発現プラスミドを作製した。まずATX3Q65をNeuro2a細胞に一過性過剰発現させた後、Proteasome阻害剤であるMG132で処理し、In vitroにおける緩徐進行性のSCA3の病態を反映させたProteasome活性低下型のATX3Q65発現Neuro2a細胞を使用した。次に細胞障害のマーカーである乳酸脱水素酵素(LDH)をELISA法で測定したところ、Proteasome未阻害型と比較してProteasome阻害型ATX3Q65発現細胞において細胞障害性が有意に上昇することが判明した。さらにProteasome阻害型ATX3Q65発現細胞において、HAP1を共発現させるとその細胞障害が有意に抑制された。これらの結果から、HAP1はプロテアソーム阻害下でのpolyQ伸長型ATX3が引き起こす細胞障害性を一部抑制することが明らかとなり、HAP1及びSTBがSCA3における神経変性に対し細胞保護的に作用している可能性が考えられた。

これまで脳内機能未知神経細胞質封入体stigmoid body(STB)およびその必須構成因子huntingtin-associated protein 1(HAP1)において、CAGリピート病を含む代表的神経変性疾患の原因分子との細胞内相互関連を検討し、病態発生に関与する疾患として脊髄小脳変性症3型(SCA3)の可能性を指摘してきた。そこで、STBがSCA3の細胞障害性に関与するかを検討するために、STBの必須構成因子huntingtin-associated protein 1(HAP1)とSCA3由来のpolyQ鎖伸長型ataxin-3(ATX3Q65)の発現プラスミドを作製した。まずATX3Q65をNeuro2a細胞に一過性過剰発現させた後、Proteasome阻害剤であるMG132で処理し、In vitroにおける緩徐進行性のSCA3の病態を反映させたProteasome活性低下型のATX3Q65発現Neuro2a細胞を使用した。次に細胞障害のマーカーである乳酸脱水素酵素(LDH)をELISA法で測定したところ、Proteasome未阻害型と比較してProteasome阻害型ATX3Q65発現細胞において細胞障害性が有意に上昇することが判明した。さらにProteasome阻害型ATX3Q65発現細胞において、HAP1を共発現させるとその細胞障害が有意に抑制された。これらの結果から、HAP1はプロテアソーム阻害下でのpolyQ伸長型ATX3が引き起こす細胞障害性を一部抑制することが明らかとなり、HAP1及びSTBがSCA3における神経変性に対し細胞保護的に作用している可能性が考えられた。