パターン化脂質二分子膜を利用したタンパク質の濃縮と2次元結晶化

使用图案化脂质双层膜进行蛋白质浓缩和二维结晶

• 批准号: 21651060
• 负责人: 森垣 憲一
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21651060/
• 关键词: 生体膜; 脂質膜ドメイン; 相分離; 2次元結晶

研究代表者は、生体膜の新しいモデル系として、光重合したポリマー脂質二分子膜と流動性脂質二分子膜をハイブリッド化するパターン化モデル生体膜作製手法を世界に先駆けて開発し、光重合条件を制御することでポリマー脂質二分子膜と流動性脂質二分子膜がナノメートルオーダーで混合したコンポジット膜を作製することに成功した。そして、パターン化脂質二分子膜において流動性脂質膜中の脂質成分が秩序液晶相と無秩序液晶相に分離・濃縮されるという新規な現象を発見した。本研究は、この現象を利用することで、膜に結合したタンパク質を基板表面のパターン化区画に濃縮することを目的とした。平成22年度は、パターン化脂質二分子膜に結合した水溶性タンパク質および膜結合型タンパク質の導入および濃縮を検討した。糖脂質(GM1)を含む脂質二分子膜に水溶性のタンパク質であるコレラ毒素(subunit B:CTB)を結合した実験では、CTBがパターン化膜中でポリマー脂質膜のない区画に濃縮される様子を全反射蛍光顕微鏡で観察することに成功した。また、流動性脂質膜にビオチンを持つ脂質を組み込み、ストレプタビジンを膜表面に結合した実験では、パターン化膜の区画中にストレプタビジンの2次元結晶が形成することが観察された。これらの結果から、水溶性タンパク質についてはパターン化基板上での濃縮および2次元結晶化が可能であることが示された。また、膜結合型タンパク質としては、パターン化膜にロドプシンを導入し、活性を計測することに成功した。これらの結果は、今後膜結合型タンパク質の濃縮、結晶化につながるものと期待される。

Research representatives は, body film の new し い モ デ ル department と し て, light overlap し た ポ リ マ ー lipid two molecules と liquidity lipid membrane two molecular membrane を ハ イ ブ リ ッ ド change す る パ タ ー ン change モ デ ル film as raw body system technique を world に 駆 first け て open 発 し, light overlap condition を suppression す る こ と で ポ リ マ ー lipid two molecules と liquidity lipid membrane two molecular membrane が ナ ノ メ ー ト ル オ ー ダ ー で mixed し た コ ン ポ ジ ッ ト membrane を cropping す る こ と に successful し た. そ し て, パ タ ー molecular membrane lipid ン 2 に お い て の lipid composition in the liquid lipid membrane liquid crystal phase と が order without order に liquid crystal phase separation, enrichment さ れ る と い う new rules な phenomenon を 発 see し た. は, this study こ の phenomenon を using す る こ と で, membrane に combining し た タ ン パ ク qualitative を substrate surface の パ タ ー ン mineralization zone painting に enrichment す る こ と を purpose と し た. 22 annual は, pp.47-53 パ タ ー molecular membrane lipid ン 2 に combining し た water-soluble タ ン パ ク qualitative お よ び type membrane bound タ ン パ ク qualitative の import お よ び enrichment を beg し 検 た. Sugar, lipid (this) contains を む lipid molecule membrane に water-soluble の タ ン パ ク qualitative で あ る コ レ ラ toxin subunit B: (CTB) を combining し た be 験 で は, CTB が パ タ ー ン film in で ポ リ マ ー lipid membrane の な い area painting に enrichment さ れ る others child を total reflection 蛍 light 顕 micromirror で す was 観 る こ と に success し た. ま た, fluidity of lipid membrane に ビ オ チ ン を hold つ lipid を group み 込 み, ス ト レ プ タ ビ ジ ン を membrane surface に combining し た be 験 で は, パ タ ー ン film の area of に ス ト レ プ タ ビ ジ ン の 2 dimensional crystallization が form す る こ と が 観 examine さ れ た. こ れ ら の results か ら, water-soluble タ ン パ ク qualitative に つ い て は パ タ ー ン the substrate で の enrichment お よ び 2 dimensional crystallization が may で あ る こ と が shown さ れ た. ま た, membrane type combined タ ン パ ク qualitative と し て は, パ タ ー ン film に ロ ド プ シ ン を import し, active を measuring す る こ と に successful し た. The <s:1> れら <s:1> results and the future expectations for the concentration and crystallization of membrane-bound タ パ パ パ chiroid <s:1> に ながる ながる と と される される.

项目成果

Micropatterned model membranes composed of polymerized and fluid lipid bilayers

由聚合和流体脂质双层组成的微图案模型膜

• 发表时间: 2010
• 作者: 森垣憲一;岡崎敬;達吉郎;今石浩正;長瀬紀子;森垣憲一
• 通讯作者: 森垣憲一