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RNA/DNAハイブリッド特異的結合リガンドの創製と小分子RNA解析

RNA/DNA 杂交特异性结合配体的创建和小分子 RNA 分析

基本信息

批准号：
21655023
负责人：
西澤精一
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、『マイクロRNA(miRNA)を標的とする核酸結合リガンドを創製、これをベースにPCR増幅を不要とするmiRNA解析法を開発すること』を目的とする。具体的には、miRNAと相補的な塩基配列を有する脱塩基部位含有プローブRNA(あるいはDNA)をハイブリダイゼーションさせることで、RNA/RNA二重鎖(RNA/DNAハイブリッド)を形成、形成したRNA/RNA二重鎖(RNA/DNAハイブリッド)を蛍光性リガンドで検出するもので、核酸プローブ中に脱塩基部位を設けることで、標的RNA/RNA二重鎖(RNA/DNAハイブリッド)の特異的かつ高感度検出が可能になると期待できる。昨年度までに、蛍光性ジアミノピラジン誘導体(アミロライド)をmiRNA検出に適用しうることを見出していたが(励起380nm、検出414nm)、本年度は、アミロライドをベースとして蛍光応答特性の改良を進めた。その結果、疎水場感受性色素(DBD)をジアミノピラジン骨格に連結することで、長波長検出(～550nm)に対応した蛍光性リガンドを開発することに成功した。1et-7aを標的とした場合、0.22pmol(1.2ng)のmiRNA検出が可能であり、既存のノーザンブロッティング法とほぼ同程度の検出感度(～ng)を有している。今後、さらにリガンドの改良を進めることで、PCR増幅を不要とするmiRNA解析法になりうると期待できる。

In this study, the nucleic acid of RNA (miRNA) was used in combination with PCR, and the miRNA analysis was used to analyze the results. The base alignment of the specific RNA/DNA and miRNA phases includes the following parts: the base contains the following parts: RNA (RNA/RNA), RNA/RNA (RNA/DNA), RNA/RNA duplex (RNA/DNA), and so on. Nucleic acid spools in nucleic acid scaffolds are used to detect the presence of high sensitivity of the RNA/RNA (RNA/DNA) duplex device in the nucleic acid template. For the year of last year, the light quality of the year (miRNA) was used to improve the performance of the device (380nm, 414nm), and this year. The results showed that the sensitive pigments (DBD), sensitive pigments (DBD), long wave length (~ 550nm), photoluminescence (UV), photoluminescence (UV) and photoluminescence (UV) were successfully tested. The 0.22pmol (1.2ng) miRNA shows that it is possible to detect the same degree of sensitivity (~ ng) in the same degree. In the future, you will need to improve your performance, and you will need to use the miRNA analysis method to improve your performance.