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体軸情報を備えた胚様体の作製

使用体轴信息创建拟胚体

基本信息

批准号：
21657059
负责人：
沖真弥
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21657059/
关键词：
再生医学細胞・組織シグナル伝達発生・分化動物

项目摘要

マウスのES細胞を浮遊培養すると、胚様体という凝集塊を形成する。その後、三胚葉を形成し、様々な組織を形成するが、極めて無秩序に分化するため、人為的に分化を制御することは難しい。そこで胚様体の性質のばらつきを調べるために、in situ hybridization法で各種分化マーカの染色をおこなった。その結果、同一シャーレ内の胚様体間だけでなく、単一胚様体内の細胞間でも性質のばらつきが非常に大きいことが明らかになった。特に中胚葉マーカは、day 8の胚様体でも約半数しか発現しておらず、さらに単一胚様体内においても発現細胞の分布はまばらであり、マウス胚のようにクラスター化されていなかった。また、原条前方マーカの発現も同様のばらつきを示したので、中胚葉の運命決定も無秩序であることが示唆された。そこで中胚葉の運命決定を均一なものにするために、FGFシグナルに着目した。マウス初期発生において、中胚葉の運命決定はFGFシグナルの濃度に依存する。したがって化学合成阻害剤でFGFシグナルのレベルを均一化できるのではないかと考えた。まず阻害剤の選別のために、マウス胚を各種FGFシグナル阻害剤で全胚培養し、FGFシグナル標的遺伝子の発現を調べたところ、PD173074という阻害剤が最も特異的かつ効果的であった。また、この阻害剤で受精後6-7日のマウス胚を培養したところ、Fgf8やその受容体Fgfr1の欠損胚と同様、沿軸中胚葉や中軸中胚葉マーカの発現異常を示した。特に沿軸中胚葉マーカの発現は阻害剤の濃度依存的に低下した。以上の結果より、胚様体のFGFシグナルをコントロールするための阻害剤として、PD173074は最も有力な候補であり、マウス胚においてはFGFシグナルのレベルを時期特異的にコントロールできることが明らかになった。

Masato ES cells are cultured in floating culture and embryos are formed into aggregates. After the formation of the three embryonic leaves, the formation of the 様々な organization, the extremely disordered differentiation, and the artificial differentiation control, it is difficult to control.そこでEmbryo 様体の性のばらつきを Adjustment べるために, in situ hybridization method で Various differentiation マーカの staining をおこなった. The result of その, the same シャーレ within the body of the embryo, the body between the body, the single embryo within the body of the body The nature of the intercellular space is very large. Special mesoderm マーカは, day 8の様体でもAbout half of the しか発appears しておらず、さらに単一Embry様内においても発appears The distribution of cells is the same as that of the cells.また, original strips in front of マーカの発appears with 様のばらつきをshows したので, mesoderm leaves's fate is determined by disorder であることがshows 膆された.そこでMesodermal leaf's fate is decided by uniichi なものにするために, FGFシグナルに目した. The initial development of the maize is dependent on the concentration of the mesoderm and the fate of the mesoderm.したがってChemical synthesis hinders 剤でFGFシグナルのレベルをhomogenization できるのではないかとtestえた. Various types of FGF, FGF, FGF, FGF, FGF, etc. The べたところ of the leftover child and the PD173074 という hinder the most special かつ effect of the であった.また、この hindering force 6-7 days after fertilization のマウスEmbryo culture したところ、Fgf8やそのReceive The defective embryo of Fgfr1 is the same as that of the damaged embryo, and the abnormality of the axial mesoderm and the central axial mesoderm is shown. The special feature is that along the axis of the mesodermal stem, the growth rate is low and concentration-dependent. The result of the above is that the FGF of the embryonic body is the most powerful one, and the PD173074 is the most powerful one. Alternate FGF FGF FGF FGF The period-specific にコントロールできることが明らかになった.