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プロテインキナーゼの基質分子同定法の新規開発とその有用性の検討

开发一种鉴定蛋白激酶底物分子的新方法并检验其有效性

基本信息

批准号：
21658119
负责人：
蔡晃植
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Nagahama Institute of Bio-Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、BiFC法を用いて特定のプロテインキナーゼの基質を網羅的に、かつ簡便に探索する方法を構築しその有用性を検証することを目的とする。最終年度の研究では、プロテインキナーゼとその基質として知られている、イネのOsMEK1とOsMAPKのC末端側にそれぞれVenusのN末端半分とC末端半分を融合したタンパク質を植物内で発現するベクターを作成し、これを同時にイネのプロトプラストに導入したところ、相互作用が確認された。そこで、新たに大腸菌で発現するベクターを作成して同じように両ベクターを大腸菌DH5α株に導入したが、BiFCによる蛍光は認められなかった。これは、大腸菌DH5α株では発現したタンパク質が正確な立体構造をとっていない可能性を考え、真核生物のタンパク質と同じ立体構造をとりやすい大腸菌株に変えて実験を行った。その結果、OsMEK1とOsMAPKの特異的な相互作用を確認することが出来、当初目的とした簡便な探索系を構築することに成功した。そこで次に、構築した検定系を用いて植物免疫の情報伝達に関与することが明らかになっているOsCPK12と相互作用する基質タンパク質のスクリーニングを行った。まず、VenusのC末端半分と融合した形で発現する植物のcDNAライブラリーを構築し、このライブラリーを用いてスクリーニングを行った。12,000クローンについてスクリーニングを行ったところ、Dynamin、CaM binding protein、Fts A等を含む319クローンを選抜することが出来た。詳細な機能ドメイン検索を行ったところ、OsCPK12は細胞周期に関わるドメインと相互作用することが新たに明らかになり、本研究で構築したスクリーニング系がプロテインキナーゼの基質を選抜し、その機能を研究する上で非常に有用であることが実証された。

In this study, the BiFC method is used to explore the usefulness of the basic network based on specific information about how to use it. In the most recent years of the year, OsMEK1

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

植物のジグナル伝達

植物中的信号传输

DOI：
发表时间：
2010
期刊：
影响因子：
0
作者：
Fang-Sik Che;Yuri Taga;Hiroyoshi Matsui;Takashi Kaneda;蔡晃植
通讯作者：
蔡晃植

植物病原細菌に存在する植物免疫誘導タンパク質のプロテオームを用いた同定とその機能解析

利用蛋白质组对植物病原菌中存在的植物免疫诱导蛋白进行鉴定和功能分析

DOI：
发表时间：
2010
期刊：
影响因子：
0
作者：
近藤真千子;乗京知宏;吉田裕貴;宇野雄太;島田真弥、蔡晃植
通讯作者：
島田真弥、蔡晃植

植物病原細菌Acidovorax avenaeを認識したタバコ(Nicotiana benthamiana)において認められる植物免疫反応誘導機構の解析

烟草（Nicotiana Benthamiana）识别植物病原菌燕麦酸食菌（Acidovorax avenae）的植物免疫应答诱导机制分析

DOI：
发表时间：
2010
期刊：
影响因子：
0
作者：
宇野雄太;乗京知宏;近藤真千子;吉田裕貴;島田真弥;蔡晃植
通讯作者：
蔡晃植

Role of OsHSP90 and IREN, Ca^<2+> dependent nuclease, in plant hypersensitive cell death induced by transcription factor OsNAC4.

OsHSP90和IREN、Ca 2+ 依赖性核酸酶在转录因子OsNAC4诱导的植物过敏性细胞死亡中的作用。

DOI：
发表时间：
2009
期刊：
Plant Signaling & Behavior 4
影响因子：
0
作者：
Taga;Y.;Takai;R.;Kaneda;T.;Matsui;H.;Isogai;A.;Che;F.S.
通讯作者：
F.S.

植物の過敏感細胞死に伴う核DNA断片化の誘導機構の解明

阐明与植物过敏性细胞死亡相关的核 DNA 断裂的诱导机制

DOI：
发表时间：
2010
期刊：
影响因子：
0
作者：
日比野孝紀;多賀有里;大坪由佳;蔡晃植
通讯作者：
蔡晃植

DOI：
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作者：
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蔡晃植其他文献

植物病原細菌Acidovorax avenae N1141菌株の全ゲノム配列の決定とゲノム情報を用いた植物免疫反応を誘導するエフェクターの同定

利用基因组信息确定植物病原菌燕麦酸食菌 N1141 菌株的全基因组序列并鉴定诱导植物免疫反应的效应子

DOI：
发表时间：
2013
期刊：
影响因子：
0
作者：
近藤真千子;仲恭輔;古川岳人;石野早紀;平子暁;蔡晃植
通讯作者：
蔡晃植

摂食タイミングが体内時計を制御する分子メカニズム

进食时间控制生物钟的分子机制

DOI：
发表时间：
2014
期刊：
影响因子：
0
作者：
鈴木愛芽;川口雄正;近藤真千子;蔡晃植;小田裕昭
通讯作者：
小田裕昭

植物種間における異なるフラジェリン認識システムの分布

不同鞭毛蛋白识别系统在植物物种中的分布

DOI：
发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
0
作者：
村上貴彦;片山貴等;高井亮太;蔡晃植
通讯作者：
蔡晃植

産業化を指向したＮ型糖鎖の系統的化学合成とEndo-M変異体による糖鎖転移

使用 Endo-M 突变体系统化学合成 N-聚糖，用于工业化和转糖基化

DOI：
发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
0
作者：
村上貴彦;片山貴等;高井亮太;蔡晃植;石田秀樹・西川宣秀・太田尚志・石原幹生・飯野健太・三郎丸みゆき・熊田純一・羽生正人・丹治嵩裕・湯浅徳行・岩城隼・加藤紀彦・山本憲二・松崎祐二
通讯作者：
石田秀樹・西川宣秀・太田尚志・石原幹生・飯野健太・三郎丸みゆき・熊田純一・羽生正人・丹治嵩裕・湯浅徳行・岩城隼・加藤紀彦・山本憲二・松崎祐二