ボトムアップ的ライブラリー構築による抗体様RNA分解酵素の創製

通过自下而上的文库构建创建类抗体RNA降解酶

• 批准号: 21710236
• 负责人: 中西 猛
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21710236/
• 关键词: RNA分解酵素; 抗体; タンパク質工学; ペプチド移植; ファージディスプレイ; 受容体; 人工結合タンパク質; 分子認識

本研究では、ヒト由来のRNA分解酵素に対して機能性人工ペプチドを導入することによって、本来の基質であるRNAとは異なる標的分子認識能を新たに付与した人工酵素の調製系を確立することを目指している。本年度の研究成果は以下の通りである。1.人工ペプチド挿入RNA分解酵素の調製系の最適化前年度に巻き戻し操作によって、不溶性画分から調製した人工ペプチド挿入RNA分解酵素は酵素活性を示したが、巻き戻し操作後の試料には多種の分子種が混在していた。そこで巻き戻し操作の更なる検討を行った結果、非還元状態での電気泳動において、ほぼ単一バンドを与える条件を見出すことができた。2.人工ペプチド挿入RNA分解酵素の機能評価tRNAを用いてRNA分解活性を評価した結果、人工ペプチド挿入RNA分解酵素は活性を示す一方で、コントロール酵素と比較して若干、低い活性であったことから、外来ペプチド挿入に伴う足場タンパク質への影響が見られた。フローサイトメトリーにより標的抗原発現細胞に対する結合活性を評価した結果、有意な結合を確認できなかったことから、人工ペプチド挿入箇所の最適化、機能性向上が重要であることがわかった。3.変異導入RNA分解酵素の作製RNA分解酵素の安定な分泌発現を目的として、宿主に対する細胞毒性を軽減するために、酵素活性部位に存在するアミノ酸残基に対して変異導入を行った。その結果、変異体は可溶性タンパク質として分泌可能であったことから、RNA分解酵素の安定なファージ提示系構築に向けて前進した。

This study aims to establish a new molecular recognition system for RNA target genes in the context of RNA degradation. This year's research results are as follows. 1. Artificial selection of RNA decomposing enzyme modulation system before optimization of the operation, insoluble protein modulation of artificial selection of RNA decomposing enzyme activity after operation of the sample mixed with a variety of molecular species. The results of the operation, the electro-kinetic state, and the conditions of the operation are shown below. 2. Functional evaluation of RNA degradation activity by artificial selection of RNA degradation enzyme. Results: The activity of artificial selection of RNA degradation enzyme was shown in one way. The activity of RNA degradation enzyme was compared with that of some enzymes. The activity of RNA degradation enzyme was low. The effect of exogenous selection on RNA degradation activity was observed. Evaluation of binding activity of target antigen producing cells, confirmation of intentional binding, optimization of artificial binding sites, and functional enhancement 3. The function of RNAase is regulated by RNAase. The secretion of RNAase is regulated by RNAase. The cytotoxicity of RNAase is reduced. The active site of RNAase is regulated by RNAase. As a result, the soluble protein was secreted, and the RNA degradation enzyme was stable, suggesting that the system was moving forward.

项目成果

ヘテロ会合性ペプチドを利用した2機能性多量体化抗体の創製

使用异缔合肽创建双功能多聚抗体

• 发表时间: 2010
• 作者: Izumi Kumagai;Mitsuo Umetsu;Haik Chosrowjan;Ryutaro Asano;Ryutaro Asano;Nozomi Yokoo;Akiko Yokota;Takamitsu Hattori;Takuya Shishido;藤澤真吾
• 通讯作者: 藤澤真吾

Biotinylated Bionanocapsules for Displaying Diverse Ligands Toward Cell-specific Delivery

• DOI: 10.1093/jb/mvp134
• 发表时间: 2009-12-01
• 期刊: JOURNAL OF BIOCHEMISTRY
• 影响因子: 2.7
• 作者: Shishido, Takuya;Azumi, Yuki;Kondo, Akihiko
• 通讯作者: Kondo, Akihiko

The effects of disappearance of one charge on ultrafast fluorescence dynamics of FMN binding protein

一个电荷消失对FMN结合蛋白超快荧光动力学的影响

• 发表时间: 2010
• 期刊: The Journal of Physical Chemistry B
• 作者: Izumi Kumagai;Mitsuo Umetsu;Haik Chosrowjan
• 通讯作者: Haik Chosrowjan

会合ペプチドユニットによる低分子抗体アセンブリ技術とその応用

利用组装肽单元的低分子抗体组装技术及其应用

• 发表时间: 2009
• 作者: Izumi Kumagai;Mitsuo Umetsu;Haik Chosrowjan;Ryutaro Asano;Ryutaro Asano;Nozomi Yokoo;Akiko Yokota;Takamitsu Hattori;Takuya Shishido;藤澤真吾;中西猛;梅津光央
• 通讯作者: 梅津光央

Direct and Selective Immobilization of Proteins by Means of an Inorganic Material-Binding Peptide: Discussion on Functionalization in the Elongation to Material-Binding Peptide

• DOI: 10.1021/jp907731b
• 发表时间: 2010-01-14
• 期刊: JOURNAL OF PHYSICAL CHEMISTRY B
• 影响因子: 3.3
• 作者: Yokoo, Nozomi;Togashi, Takanari;Adschiri, Tadafumi
• 通讯作者: Adschiri, Tadafumi